Описание
Именно это раннее диагностическое окно делает ПЦР незаменимым методом при подозрении на клещевой энцефалит в первые дни от укуса клеща или от появления симптомов – когда серологические тесты ещё не информативны. Клещевой энцефалит является тяжёлым вирусным заболеванием с преимущественным поражением центральной нервной системы – и своевременная диагностика в первые дни является принципиальным условием для проведения экстренной профилактики и своевременного начала поддерживающей терапии. МЦ «Альтернатива» включает ПЦР-диагностику клещевого энцефалита в обследование при укусе клеща и при симптомах поражения ЦНС в весенне-летний период.
Что такое клещевой энцефалит и почему ранняя диагностика критически важна
Клещевой энцефалит вызывается флавивирусом TBEV – Tick-borne encephalitis virus – передающимся преимущественно через укус иксодовых клещей. Пик заболеваемости приходится на весенне-летний период – время максимальной активности клещей. Резервуаром вируса в природе являются также птицы, грызуны и хищные животные.
- механизм заражения и инкубационный период. Вирус передаётся при укусе инфицированного клеща – как правило в течение нескольких часов контакта. Возможно также заражение при употреблении сырого молока инфицированных животных – алиментарный путь. Инкубационный период составляет от 3 до 7 дней – в этот период вирус активно реплицируется в месте укуса и регионарных лимфоузлах, затем поступает в кровоток
- формы и тяжесть заболевания. Клещевой энцефалит протекает в нескольких формах различной тяжести. Лихорадочная форма – наиболее лёгкая – характеризуется высокой температурой, головной болью, слабостью и тошнотой в течение 3-5 дней с быстрым выздоровлением. Менингеальная форма – наиболее распространённая – протекает с сильными головными болями, усиливающимися при движении головы, головокружением, тошнотой, рвотой, светобоязнью, заторможенностью в течение 1-2 недель. Менингоэнцефалитическая форма добавляет бред, галлюцинации, нарушения речи, зрения и слуха, возможны эпилептические припадки. Полиомиелитическая форма вызывает слабость и атрофию мышц – особенно шейно-плечевой группы. При полирадикулоневритической форме возможен восходящий паралич Ландри с угрозой дыхательной недостаточности
- почему ранняя диагностика принципиальна. Специфической противовирусной терапии, уничтожающей TBEV, не разработано. Однако в качестве экстренной профилактики при подтверждённом заражении применяется введение специфического гамма-глобулина – которое наиболее эффективно именно в ранние сроки. При диагностике в первые дни от укуса до появления неврологической симптоматики – прогноз значительно лучше, чем при поздней диагностике
Что такое ПЦР-диагностика и почему она эффективнее серологии в ранней фазе
- принцип метода. ПЦР – полимеразная цепная реакция – является молекулярно-биологическим методом, выявляющим специфические участки РНК вируса в исследуемом образце. При наличии вирусной РНК в плазме крови специфические праймеры, комплементарные уникальным участкам генома TBEV, инициируют многократное копирование целевого фрагмента. При наличии РНК вируса – копирование происходит, результат положительный. При её отсутствии – реакция не идёт, результат отрицательный
- преимущества ПЦР перед IgM в ранней фазе. IgM к вирусу клещевого энцефалита начинают определяться в крови при первых симптомах и достигают диагностически значимых концентраций через 3,5-4,5 недели. В первые дни от укуса или от появления симптомов – IgM могут быть отрицательными даже при реальном заражении. ПЦР выявляет РНК вируса уже в первые дни виремии – в период, когда вирус активно реплицируется и циркулирует в крови, до формирования антительного ответа
- независимость от иммунного статуса. При иммунодефиците выработка антител может быть снижена – IgM дают ложноотрицательные результаты. ПЦР не зависит от иммунного статуса – она выявляет РНК вируса независимо от способности организма вырабатывать антитела
- качественное определение. Данный формат анализа даёт однозначный ответ – РНК TBEV выявлена или не выявлена. Это достаточно для подтверждения или исключения активной инфекции
Показания к назначению анализа ПЦР к клещевому энцефалиту
Анализ назначается неврологом, инфекционистом или терапевтом.
Основные показания:
- укус клеща в эндемичном районе – особенно при длительном контакте клеща с кожей более 6-12 часов
- симптомы острого инфекционного заболевания после укуса клеща – лихорадка, головная боль, слабость
- подозрение на клещевой энцефалит в первые дни от появления симптомов – до формирования IgM в диагностически значимых концентрациях
- дифференциальная диагностика поражений центральной нервной системы в весенне-летний период
- тяжёлые неврологические симптомы при эпидемиологическом анамнезе – пребывание в лесу, контакт с клещами
Оптимальные сроки для ПЦР-диагностики. Наиболее информативно исследование в период виремии – первые 1-2 недели от заражения, когда вирус активно реплицируется и присутствует в плазме крови в определяемых концентрациях. При более позднем обращении – после 2-3 недель от начала симптомов – вирус может быть элиминирован из кровотока иммунной системой, и ПЦР становится менее информативной. В этом случае серологические методы – IgM и IgG – являются более предпочтительными.
Интерпретация результатов анализа ПЦР к клещевому энцефалиту
Положительный результат. РНК вируса клещевого энцефалита выявлена в плазме крови – активная TBEV-инфекция подтверждена. При наличии симптомов – основание для немедленной госпитализации и начала поддерживающей терапии. При отсутствии симптомов после укуса клеща – подтверждение заражения и показание для экстренной профилактики.
Отрицательный результат. РНК вируса не выявлена. Возможные причины: заражения не было; с момента укуса прошло слишком мало времени – вирус ещё не достиг определяемой концентрации в крови; вирус уже элиминирован из кровотока при позднем обращении. При сохраняющемся клиническом подозрении и отрицательной ПЦР – рекомендуется серологическое исследование на IgM и повторная ПЦР через 3-5 дней.
Совместная интерпретация ПЦР и серологии:
- ПЦР положительная + IgM отрицательный – ранняя острая инфекция, виремическая фаза
- ПЦР отрицательная + IgM положительный – острая инфекция с уже сформировавшимся антительным ответом, вирус элиминирован из кровотока
- ПЦР положительная + IgM положительный – разгар инфекции
- обе отрицательные при симптомах – повторное исследование через 3-5 дней или поиск других этиологий
Часто задаваемые вопросы об анализе ПЦР к клещевому энцефалиту
- Когда лучше сдавать ПЦР после укуса клеща? Оптимально через 3-5 дней после укуса – к этому времени при заражении вирус достигает определяемой концентрации в крови. Сдача в первые сутки может дать ложноотрицательный результат из-за ещё недостаточной концентрации вируса.
- Если ПЦР отрицательная после укуса – можно успокоиться? При отрицательной ПЦР через 5-7 дней после укуса вероятность заражения значительно снижается. Но при появлении симптомов – лихорадка, головная боль – необходимо немедленно обратиться к врачу и повторить обследование.
- Нужна ли ПЦР при уже имеющихся симптомах энцефалита? Да – особенно в первые 1-2 недели от появления симптомов. Положительная ПЦР подтверждает диагноз раньше, чем формируются IgM. При симптомах длительностью более 2-3 недель – IgM и IgG становятся более информативными.
- Можно ли заразиться клещевым энцефалитом без укуса клеща? Да – возможно заражение при употреблении сырого молока инфицированных коз или коров. В этом случае также обосновано ПЦР-обследование при появлении симптомов.
- Нужно ли исследовать самого клеща, а не кровь пациента? Исследование клеща на TBEV возможно – и позволяет оценить риск заражения немедленно после укуса. Однако исследование крови пациента является более клинически значимым – оно подтверждает факт инфицирования именно человека, а не просто носительство вируса клещом.
ПЦР-диагностика вируса клещевого энцефалита является методом выбора в ранней фазе инфекции – выявляя РНК вируса в период виремии до формирования антительного ответа. Именно в этот период ранняя диагностика наиболее значима для своевременной профилактики и лечения. В сочетании с серологическими методами – IgM и IgG – ПЦР формирует полную диагностическую картину инфекции на любой стадии. МЦ «Альтернатива» включает ПЦР-диагностику клещевого энцефалита в обследование при укусе клеща и при симптомах поражения ЦНС в весенне-летний период.
Материал для исследования – плазма крови. Специальной подготовки не требуется. Кровь желательно сдавать как можно раньше после укуса клеща или от начала симптомов – оптимально в первые 7-14 дней.
Метод исследования – ПЦР Real-Time (полимеразная цепная реакция в режиме реального времени). Выявляет специфические участки РНК вируса клещевого энцефалита TBEV в плазме крови с высокой чувствительностью и специфичностью.
Срок выполнения – 3 рабочих дня.