Опис
Саме це раннє діагностичне вікно робить ПЛР незамінним методом при підозрі на кліщовий енцефаліт у перші дні після укусу кліща або від появи симптомів – коли серологічні тести ще не є інформативними. Кліщовий енцефаліт є важким вірусним захворюванням переважно з ураженням центральної нервової системи – і своєчасна діагностика в перші дні є принциповою умовою для проведення екстреної профілактики та своєчасного початку підтримувальної терапії. МЦ «Альтернатива» включає ПЛР-діагностику кліщового енцефаліту в обстеження при укусі кліща та при симптомах ураження ЦНС у весняно-літній період.
Що таке кліщовий енцефаліт і чому рання діагностика критично важлива
Кліщовий енцефаліт викликається флавівірусом TBEV – Tick-borne encephalitis virus – що передається переважно через укус іксодових кліщів. Пік захворюваності припадає на весняно-літній період – час максимальної активності кліщів. Резервуаром вірусу в природі є також птахи, гризуни та хижі тварини.
- механізм зараження та інкубаційний період. Вірус передається при укусі інфікованого кліща – як правило, протягом кількох годин контакту. Можливе також зараження при вживанні сирого молока інфікованих тварин – аліментарний шлях. Інкубаційний період становить від 3 до 7 днів – у цей період вірус активно реплікується в місці укусу та регіонарних лімфовузлах, потім надходить у кровотік
- форми та тяжкість захворювання. Кліщовий енцефаліт протікає в кількох формах різної тяжкості. Гарячкова форма – найлегша – характеризується високою температурою, головним болем, слабкістю та нудотою протягом 3-5 днів зі швидким одужанням. Менінгеальна форма – найпоширеніша – протікає із сильними головними болями, що посилюються при русі голови, запамороченням, нудотою, блюванням, фотофобія, загальмованістю протягом 1-2 тижнів. Менінгоенцефалітична форма додає марення, галюцинації, порушення мовлення, зору та слуху, можливі епілептичні напади. Поліомієлітична форма викликає слабкість та атрофію м’язів – особливо шийно-плечової групи. При полірадикулоневритичній формі можливий висхідний параліч Ландрі із загрозою дихальної недостатності
- чому рання діагностика є принциповою. Специфічної противірусної терапії, яка знищує TBEV, не розроблено. Однак як екстрена профілактика при підтвердженому зараженні застосовується введення специфічного гамма-глобуліну – яке найбільш ефективне саме в ранні терміни. При діагностиці в перші дні від укусу до появи неврологічної симптоматики – прогноз значно кращий, ніж при пізній діагностиці
Що таке ПЛР-діагностика і чому вона ефективніша за серологію в ранній фазі
- принцип методу. ПЛР – полімеразна ланцюгова реакція – є молекулярно-біологічним методом, що виявляє специфічні ділянки РНК вірусу в досліджуваному зразку. За наявності вірусної РНК у плазмі крові специфічні праймери, комплементарні унікальним ділянкам геному TBEV, ініціюють багаторазове копіювання цільового фрагмента. За наявності РНК вірусу – копіювання відбувається, результат позитивний. За її відсутності – реакція не йде, результат негативний
- переваги ПЛР перед IgM у ранній фазі. IgM до вірусу кліщового енцефаліту починають визначатися в крові при перших симптомах і досягають діагностично значущих концентрацій через 3,5-4,5 тижні. У перші дні від укусу або від появи симптомів – IgM можуть бути негативними навіть при реальному зараженні. ПЛР виявляє РНК вірусу вже в перші дні віремії – у період, коли вірус активно реплікується і циркулює в крові, до формування антитільної відповіді
- незалежність від імунного статусу. При імунодефіциті вироблення антитіл може бути знижене – IgM дають хибнонегативні результати. ПЛР не залежить від імунного статусу – вона виявляє РНК вірусу незалежно від здатності організму виробляти антитіла
- якісне визначення. Даний формат аналізу дає однозначну відповідь – РНК TBEV виявлено чи не виявлено. Цього достатньо для підтвердження або виключення активної інфекції
Показання до призначення аналізу ПЛР до кліщового енцефаліту
Аналіз призначається неврологом, інфекціоністом або терапевтом.
Основні показання:
- укус кліща в ендемічному районі – особливо при тривалому контакті кліща зі шкірою понад 6-12 годин
- симптоми гострого інфекційного захворювання після укусу кліща – лихоманка, головний біль, слабкість
- підозра на кліщовий енцефаліт у перші дні від появи симптомів – до формування IgM у діагностично значущих концентраціях
- диференціальна діагностика уражень центральної нервової системи у весняно-літній період
- важкі неврологічні симптоми при епідеміологічному анамнезі – перебування в лісі, контакт із кліщами
Оптимальні терміни для ПЛР-діагностики. Найбільш інформативним є дослідження в період віремії – перші 1-2 тижні від зараження, коли вірус активно реплікується і присутній у плазмі крові у визначуваних концентраціях. При більш пізньому зверненні – після 2-3 тижнів від початку симптомів – вірус може бути елімінований із кровотоку імунною системою, і ПЛР стає менш інформативною. У цьому випадку серологічні методи – IgM та IgG – є більш переважними.
Інтерпретація результатів аналізу ПЛР до кліщового енцефаліту
Позитивний результат. РНК вірусу кліщового енцефаліту виявлено в плазмі крові – активну TBEV-інфекцію підтверджено. За наявності симптомів – це підстава для негайної госпіталізації та початку підтримувальної терапії. За відсутності симптомів після укусу кліща – підтвердження зараження та показання для екстреної профілактики.
Негативний результат. РНК вірусу не виявлено. Можливі причини: зараження не було; з моменту укусу минуло занадто мало часу – вірус ще не досяг визначуваної концентрації в крові; вірус уже елімінований із кровотоку при пізньому зверненні. При збереженні клінічної підозри та негативній ПЛР – рекомендується серологічне дослідження на IgM та повторна ПЛР через 3-5 днів.
Спільна інтерпретація ПЛР та серології:
- ПЛР позитивна + IgM негативний – рання гостра інфекція, віремічна фаза
- ПЛР негативна + IgM позитивний – гостра інфекція з уже сформованою антитільною відповіддю, вірус елімінований із кровотоку
- ПЛР позитивна + IgM позитивний – розпал інфекції
- обидва негативні при симптомах – повторне дослідження через 3-5 днів або пошук інших етіологій
Поширені запитання про аналіз ПЛР до кліщового енцефаліту
- Коли краще здавати ПЛР після укусу кліща? Оптимально через 3-5 днів після укусу – до цього часу при зараженні вірус досягає визначуваної концентрації в крові. Здача в першу добу може дати хибнонегативний результат через ще недостатню концентрацію вірусу.
- Якщо ПЛР негативна після укусу – можна заспокоїтися? При негативній ПЛР через 5-7 днів після укусу ймовірність зараження значно знижується. Але при появі симптомів – лихоманка, головний біль – необхідно негайно звернутися до лікаря та повторити обстеження.
- Чи потрібна ПЛР при вже наявних симптомах енцефаліту? Так – особливо в перші 1-2 тижні від появи симптомів. Позитивна ПЛР підтверджує діагноз раніше, ніж формуються IgM. При симптомах тривалістю понад 2-3 тижні – IgM та IgG стають більш інформативними.
- Чи можна заразитися кліщовим енцефалітом без укусу кліща? Так – можливе зараження при вживанні сирого молока інфікованих кіз або корів. У цьому випадку також обґрунтоване ПЛР-обстеження при появі симптомів.
- Чи потрібно досліджувати самого кліща, а не кров пацієнта? Дослідження кліща на TBEV можливе – і дозволяє оцінити ризик зараження негайно після укусу. Проте дослідження крові пацієнта є більш клінічно значущим – воно підтверджує факт інфікування саме людини, а не просто носійство вірусу кліщем.
ПЛР-діагностика вірусу кліщового енцефаліту є методом вибору в ранній фазі інфекції – виявляючи РНК вірусу в період віремії до формування антитільної відповіді. Саме в цей період рання діагностика є найбільш значущою для своєчасної профілактики та лікування. У поєднанні з серологічними методами – IgM та IgG – ПЛР формує повну діагностичну картину інфекції на будь-якій стадії. МЦ «Альтернатива» включає ПЛР-діагностику кліщового енцефаліту в обстеження при укусі кліща та при симптомах ураження ЦНС у весняно-літній період.
Матеріал для дослідження – плазма крові. Спеціальної підготовки не потрібно. Кров бажано здавати якомога раніше після укусу кліща або від початку симптомів – оптимально в перші 7-14 днів.
Метод дослідження – ПЛР Real-Time (полімеразна ланцюгова реакція в режимі реального часу). Виявляє специфічні ділянки РНК вірусу кліщового енцефаліту TBEV у плазмі крові з високою чутливістю та специфічністю.
Термін виконання – 3 робочих дні.