Эффективность применения озонотерапии при циррозе печени: результаты исследований

Статистика смертности от цирроза печени в 9 странах, основанные на различных источниках и опубликованных данных:

• США. Смертность: Около 35,000 смертей в год. Частота: 10.6 случаев на 100,000 населения.
• Украина. Смертность: Около 8,500 — 11,000 смертей в год. Частота: 20-25 случаев на 100,000 населения.
• Германия. Смертность: Около 10,000 смертей в год. Частота: 12 случаев на 100,000 населения.
• Франция. Смертность: Около 7,000 смертей в год. Частота: 11.3 случая на 100,000 населения.
• Великобритания. Смертность: Около 4,500 смертей в год. Частота: 8 случаев на 100,000 населения.
• Индия. Смертность: Около 100,000 смертей в год. Частота: 7-8 случаев на 100,000 населения (с учетом высокого общего населения).
• Китай. Смертность: Более 300,000 смертей в год. Частота: 22 случая на 100,000 населения.
• Япония. Смертность: Около 30,000 смертей в год. Частота: 12 случаев на 100,000 населения.
• Бразилия. Смертность: Около 15,000 смертей в год. Частота: 7.5 случаев на 100,000 населения.

Эти данные предоставляют общую картину заболеваемости и смертности от цирроза печени в разных странах, однако важно учитывать, что эти показатели меняются в зависимости от года и источника данных.

Цирроз печени является причиной 85-95% летальных исходов при хронических заболеваниях печени, а также наиболее частой причиной смерти среди неопухолевых заболеваний органов желудочно-кишечного тракта.

Исследования показали, что оксидативный стресс и связанное с ним поражение печени могут быть одним из механизмов патогенеза при циррозе и других хронических заболеваниях печени. Усиление перекисного окисления липидов, которое наблюдается при хронических заболеваниях печени, часто не сопровождается адекватным повышением активности ферментов антиоксидантной системы, таких как супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза. Учитывая это, патогенетически обоснованным является назначение средств для коррекции дисбаланса окислительных и антиоксидантных процессов при циррозе печени. В качестве такого средства может использоваться медицинский озон (озоно-кислородная смесь).

Медицинский озон – это озоно-кислородная смесь, состоящая из 0,05-10% озона и 99,95-90% чистого кислорода, получаемая из сверхчистого кислорода путем его разложения в слабом электрическом разряде. Ключевым аспектом в озонотерапии является парентеральное применение малых доз озоно-кислородной смеси, поскольку в больших концентрациях озон является токсичным и проявляет себя как мощный окислитель.

В настоящее время признано, что окислительное повреждение различных макромолекул, составляющих структурную основу всех живых организмов (нуклеиновых кислот, белков, липидов), – это основное проявление так называемого окислительного стресса. За последние десятилетия внимание к свободным радикалам, как к высокоактивным и деструктивным молекулам, значительно возросло, поскольку они играют важную роль в сохранении здоровья и развитии заболеваний. Учитывая биологическую роль молекулярного кислорода, особое значение придается изучению его влияния, а также его разнообразных высокоактивных производных, объединяемых под понятием «активные формы кислорода» (АФК). Живые организмы часто подвергаются токсическому воздействию различных АФК как экзо-, так и эндогенного происхождения. Однако в некоторых случаях такое воздействие может оказывать положительное влияние на организм, например, при использовании гипербарической оксигенации и озонирования в терапевтических целях.

Так как при озонотерапии в организм вводятся активные формы кислорода, важно рассмотреть вопрос о влиянии озоно-кислородной смеси на индукцию прооксидантных процессов.

В многочисленных исследованиях показано, что терапевтические дозы озоно-кислородной смеси стимулируют антиоксидантную систему и, в конечном итоге, снижают интенсивность свободно-радикальных процессов. Механизм действия озоно-кислородной смеси можно описать так: под влиянием озонотерапии происходит начальная активация свободнорадикального окисления, что объясняется введением в организм озоно-кислородной смеси, свободных радикалов при внутривенных капельных инфузиях озонированного изотонического раствора хлорида натрия. Это быстро активирует антиоксидантную систему защиты, которая, вероятно, опосредованно стимулируется озоном. Предполагается, что антиоксидантная система активно работает на стадии активации процессов перекисного окисления липидов, препятствуя образованию и накоплению продуктов перекисного окисления липидов, таких как малоновый диальдегид.

Озоно-кислородная смесь, проникая внутрь клеток, связывается с полиненасыщенными жирными кислотами и образует биологически активные озониды. Эти озониды активируют глутатионовую систему организма, обладающую мощным антиоксидантным эффектом. Таким образом, одним из основных механизмов терапевтического действия озоно-кислородной смеси является восстановление динамического равновесия между процессами перекисного окисления липидов и антиоксидантной системой защиты организма. Кроме того, озонотерапия обладает различными метаболическими эффектами и воздействует на различные точки организма, что подтверждено рядом исследований. Применение озоно-кислородной смеси активирует макрофагальную защиту, способствует индукции цитокинов и положительно влияет на микроциркуляцию.

Методы озонотерапии для поддержания организма при циррозе печени в МЦ «Альтернатива»

Озонотерапия используется в поддерживающей терапии при циррозе печени для улучшения состояния пациента и замедления прогрессирования заболевания.

• Озонированная вода. Приготовление озонированной воды с низкой концентрацией озоно-кислородной смеси (1-3 мг/л) и её применение внутрь.
  • уменьшение окислительного стресса, улучшение микроциркуляции в желудочно-кишечном тракте и детоксикация
• Озонированное масло. Использование озонированного растительного масла (чаще всего оливкового) для местного применения или для внутреннего приема.
  • антибактериальное и противовоспалительное действие, улучшение состояния кожи и слизистых оболочек
• Интравенозное введение озоно-кислородной смеси. Введение озонированного физиологического раствора (0,9% NaCl) в вену.
  • улучшение общего состояния, активация антиоксидантной системы, улучшение микроциркуляции и повышение общего уровня кислорода в организме
• Ректальные инсуффляции озоно-кислородной смесью. Введение озоно-ксилородной смеси через ректум с помощью специального устройства.
  • улучшение функции печени, уменьшение воспаления и токсичности в области кишечника, улучшение обменных процессов
• Большая аутогемоозонотерапия. Процедура, при которой кровь пациента смешивается с озоноо-кислородной смесью и возвращается обратно в кровоток.
  • улучшение состояния крови, активация клеточного метаболизма, снижение уровня токсичных продуктов в крови
• Наружное примнение озонированных масел и растворов. Использование озонированных растворов или масла для наружного применения на кожу.
  • улучшение состояния кожи, уменьшение симптомов воспаления и экземы, связанные с циррозом
• Массаж с озонированными маслами. Использование озонированных масел для проведения массажных процедур.
  • улучшение кровообращения, уменьшение отеков и болевых ощущений, стимулирование обменных процессов

Рекомендации по применению озонотерапии при циррозе печени

• Консультация с врачом перед началом озонотерапии, особенно при наличии цирроза печени, чтобы избежать побочных эффектов и осложнений.
• Комплексный подход. Озонотерапия — часть комплексной программы лечения, включающей методы детоксикации орагнизма, проведение противопаразитаной терпаии в стационаре медицинского центра «Альтернатива» (амбулаторно), медикаментозную терапию, диету и другие поддерживающие меры.
• Мониторинг. Регулярное медицинское наблюдение и мониторинг состояния пациента необходимы для оценки эффективности и корректировки терапии.

Материал и методы исследования эффективности примения озонотерапии при циррозе печени

Для оценки влияния озонотерапии на показатели прооксидантной и антиоксидантной систем организма при циррозе печени использовались белые крысы-самцы линии Вистар (n=15).

Экспериментальные исследования проводились в соответствии с приказом Минвуза СССР №742 от 13 ноября 1984 г. «Об утверждении правил работ с использованием экспериментальных животных», Конвенцией по защите животных, используемых в эксперименте и других научных целях, принятой Советом Европы в 1986 году, а также согласно «Положению о порядке использования лабораторных животных в научно-исследовательских работах и педагогическом процессе Гомельского государственного медицинского института и мерах по реализации требований биомедицинской этики», утвержденному Ученым Советом ГГМУ №54-А от 23.05.2002 года, и требованиям, регламентирующим работу с экспериментальными животными.

Для моделирования цирроза печени у крыс использовалась собственная токсико-алиментарная модель.

Суть модели заключалась в следующем:

• Крысам в течение 8 недель вводили внутрибрюшинно 50% раствор CCl₄ в оливковом масле в дозе 0,5 мл/кг массы тела два раза в неделю и раствор тиоацетамида в дозе 100 мг/кг один раз в неделю.
• Ежесуточно с кормом животным вводили 5 г топленого свиного сала, а также добавляли к питьевой воде 5% раствор этилового спирта. Этот способ позволяет повысить воспроизводимость цирроза печени, сократить время моделирования и достичь более устойчивого результата с меньшей обратимостью патологических изменений в печени. На данную модель был получен положительный результат предварительной экспертизы по заявке на патент Республики Беларусь на изобретение № а 20160406 от 20.11.2016.

Экспериментальных животных разделили на 3 группы: две контрольные и одну экспериментальную. Моделирование цирроза печени проводили у крыс групп 2 и 3.

Озонотерапия осуществлялась путем внутрибрюшинного введения стерильного озонированного физиологического раствора (0,9% раствор натрия хлорида). ОФР (озонокислородная смесь) получали путем барботирования стерильного физиологического раствора озонокислородной смесью с концентрацией озоно-кислородной смеси на выходе из озонатора от 1 до 10 мг/л. Озонирование проводилось на медицинской озонотерапевтической установке УОТА-60-01 «Медозон». В исследовании использовался ОФР в концентрации 5 мг/л. После озонирования полученный раствор вводили крысам путем внутрибрюшинной инъекции инсулиновым шприцем под кратковременным масочным наркозом. Озонотерапию проводили курсом из 5 процедур, которые выполняли ежедневно в одно и то же время.

Объект и методы исследования

Объектом исследования были выбраны сыворотка крови и образцы печени крыс. После завершения эксперимента кровь собирали в одноразовые полипропиленовые пробирки (SARSTEDT) и выдерживали при температуре 4°C в течение 1 часа. Для получения сыворотки кровь центрифугировали (2000g, 20 минут, 4°C), затем сыворотку помещали в микропробирки (Eppendorf) и хранили при -80°C до момента использования.

В сыворотке крови определялись следующие показатели: концентрация ТБК-активных продуктов (Thiobarbituric acid reactive substances, TBARS), конечных продуктов окисления белков (advanced oxidation protein products, AOPP), карбонилов белков, активность глутатионпероксидазы. Концентрация общего белка в сыворотке определялась биуретовым методом, используя тест-систему в соответствии с инструкцией производителя.

Образцы ткани печени немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до использования, не допуская преждевременного размораживания. Разморозка проводилась в ледяном физиологическом растворе. Подготовленные образцы тканей измельчались на льду и гомогенизировались в гомогенизаторе Поттера-Эльведжейма. Соотношение ткань: буфер составляло 1:9 (масса:объем). Использовался 10 мМ Na-фосфатный буфер (рН 7.0) с добавлением коктейля ингибиторов протеаз (Sigma P8340). Гомогенат центрифугировался (20000g, 10 минут, 4°C) для получения постмитохондриальной фракции тканей (цитозоль + микросомы). Полученный супернатант помещали в микропробирки (Eppendorf) и хранили при -80°C до использования. В полученных образцах определяли концентрацию ТБК-активных продуктов, карбонилов белков, конечных продуктов окисления белков, активность глутатион-S-трансферазы, супероксиддисмутазы, а также концентрацию протеиновых сульфгидрильных (-SH) групп. Концентрация белка в постмитохондриальной фракции ткани печени определялась методом Лоури, а расчет активности ферментов осуществлялся согласно методике.

Измерения оптической плотности и интенсивности флуоресценции выполнялись на микропланшетном ридере Tecan Infinite M200 (Tecan Ltd., Швейцария) с использованием 96-луночных микропланшетов (SARSTEDT и Greiner Bio-One), а также специализированного программного обеспечения Tecan Magellan (v 6.6).

Анализ и обработка полученных данных проводились с использованием пакета программ Statistica 8 (Statsoft, США). Для оценки различий между показателями экспериментальных групп использовались непараметрические методы. В случае сравнения двух независимых групп применялся критерий Манна-Уитни, а при сравнении трех независимых групп — критерий Краскела-Уоллиса. Статистически значимыми результаты считались при p<0,05.

Характеристика экспериментальных групп

Экспериментальных животных разделили на 3 группы:

• Группа 1 – контрольная (n=5). Здоровые животные, которым не проводили моделирование цирроза печени. Эта группа использовалась для определения «нормальных» показателей маркеров окислительного стресса и антиоксидантных механизмов и их сравнения с показателями других групп.
• Группа 2 (n=5). После моделирования цирроза печени крысам прекращали токсическое воздействие и вводили стерильный изотонический физиологический раствор в количестве 1 мл в течение 5 дней. Эта группа служила контрольной по отношению к экспериментальной группе 3.
• Группа 3 (n=5). После моделирования цирроза печени крысам вводили стерильный озонированный изотонический физиологический раствор в течение 5 дней для оценки влияния озонотерапии на показатели окислительного стресса и антиоксидантных механизмов.

При экспериментальном циррозе печени отмечается статистически значимое повышение показателей окислительных процессов и снижение активности антиоксидантных ферментов по сравнению с нормальными показателями. Этот дисбаланс свидетельствует о нарушении нормальных механизмов защиты организма от свободнорадикальных повреждений.

Курс озонотерапии оказывает положительное влияние на этот дисбаланс. Под воздействием озонотерапии происходит статистически значимое снижение уровня большинства маркеров окислительного стресса. Одновременно отмечается повышение активности антиоксидантных ферментов, что указывает на восстановление баланса между окислительными и антиоксидантными процессами в организме. Эти изменения подтверждают эффективность озонотерапии в улучшении состояния организма при циррозе печени и восстановлении его антиоксидантной защиты.

Исследования проводились Гомельским государственным медицинским университетом, г. Гомель, Республика Беларусь. Институт радиобиологии НАН Беларуси, г. Гомель, Республика Беларусь

Отзывы — озонотерапия при циррозе печени