Герпес вірус (Herpes simplex virus) 1,2 типу, зішкріб, сеча, біоптат, змив з кон’юнктиви ока, методом ПЛР Real-Time, якісне визначення

Герпесвірус 1 і 2 типу, ПЛР Real-Time – метод прямого виявлення ДНК вірусу простого герпесу безпосередньо в біологічному матеріалі, інформативний там і тоді, де серологічні тести на антитіла не дають відповіді. Принципова перевага ПЛР – її незалежність від імунної відповіді пацієнта: аналіз виявляє ДНК вірусу на ранніх термінах зараження, коли імунна система ще не виробила визначуваної кількості антитіл, а також при імунодефіцитних станах, коли вироблення антитіл порушене. Широкий вибір біоматеріалів – зішкріб зі слизової, сеча, біоптат, змив із кон’юнктиви ока – дозволяє досліджувати безпосередньо зону ураження та отримати найбільш достовірний результат незалежно від локалізації герпетичних проявів.

Обидва типи вірусу – HSV-1 із переважною локалізацією в ділянці рота та губ, і HSV-2 з генітальною локалізацією – виявляються в межах одного дослідження. Як TORCH-інфекції обидва типи HSV становлять особливу небезпеку при вагітності – здатні викликати викидень, передчасні пологи та внутрішньоутробні патології плода.

У МЦ «Альтернатива» ПЛР на HSV-1/2 проводиться у складі комплексного обстеження при плануванні вагітності та діагностиці урогенітальних інфекцій.

Чому ПЛР інформативніша за антитіла в низці клінічних ситуацій

Серологічні тести на IgM та IgG є цінними діагностичними інструментами – але мають принципові обмеження, які ПЛР долає.

Раннє зараження – серологічне «вікно»:

Після зараження IgM з’являються через 4–6 днів, IgG – через 1,5–2 тижні. У цей період серологія ще не є інформативною, тоді як ПЛР виявляє ДНК вірусу з перших днів активної реплікації – фактично з моменту появи висипань.

Імунодефіцит:

При ВІЛ, імуносупресивній терапії, після трансплантації імунна система може не виробляти достатньої кількості антитіл – серологія дає хибнонегативний результат при реальній активній інфекції. ПЛР не залежить від імунної відповіді пацієнта.

Нетипові форми та атипова локалізація:

При герпетичному ураженні кон’юнктиви, нетипових висипаннях або ураженні без класичних везикул клінічна діагностика ускладнена. ПЛР підтверджує HSV як збудника об’єктивно.

Пряме виявлення при висипаннях:

За наявності активних везикул вміст пухирців і зішкріб зі слизової містять максимальну концентрацію вірусної ДНК – ПЛР у цей період є найбільш чутливою.

Вибір біоматеріалу залежно від клінічної ситуації

• зішкріб зі слизової – оптимальний матеріал при висипаннях: за наявності активних везикул або ерозій зішкріб з ураженої слизової забезпечує максимальну концентрацію ДНК і найбільшу чутливість. Це найкращий матеріал при лабіальному або генітальному герпесі з активованими висипаннями. Оптимально забирати матеріал у перші дні висипань – до утворення кірочок
• сеча – для діагностики урогенітального герпесу інформативна при ураженні уретри та при діагностиці генітального герпесу як додатковий матеріал. Перед забором сечі рекомендується утриматися від сечовипускання 1,5–2 години
• біоптат – при ураженні тканин застосовується при нетипових формах з ураженням тканин – для підтвердження герпетичної етіології ураження за необхідності гістологічної та вірусологічної верифікації одночасно
• змив із кон’юнктиви ока – при офтальмологічному герпесі: герпетичний кератокон’юнктивіт – одне з найсерйозніших проявів HSV-1, здатне при рецидивуючому перебігу призводити до рубцювання рогівки та зниження зору. Змив із кон’юнктиви є специфічним матеріалом для підтвердження HSV як збудника офтальмологічного ураження – необхідного для призначення специфічної противірусної терапії

Показання до призначення аналізу ПЛР (зішкріб, сеча, біоптат) до герпесвірусу 1, 2 типу

Аналіз призначається акушерами-гінекологами, інфекціоністами та урологами.

Акушерсько-гінекологічні показання:

• планування вагітності – обстеження бажане обом майбутнім батькам; ПЛР виявляє активну інфекцію до зачаття
• симптоми внутрішньоутробної інфекції плода – ПЛР як метод прямого підтвердження HSV
• фетоплацентарна недостатність при підозрі на герпетичну етіологію
• пошук урогенітальних інфекцій у комплексному обстеженні

Інфекційні показання:

• висипання, характерні для герпесу – особливо при первинному епізоді для підтвердження та типування збудника
• імунодефіцит – ПЛР як метод вибору при порушенні вироблення антитіл
• підозра на ВІЛ – діагностика герпесу як асоційованої інфекції

Урологічні показання:

• діагностика ІПСШ – ПЛР як метод прямого виявлення HSV при урогенітальних інфекціях

Офтальмологічні показання:

• герпетичний кератит або кон’юнктивіт – підтвердження HSV-етіології ураження рогівки та кон’юнктиви

Інтерпретація результатів аналізу ПЛР (зішкріб, сеча, біоптат) до герпесвірусу 1, 2 типу

Аналіз є якісним – результат виражається як «виявлено» або «не виявлено».

• «Не виявлено» – ДНК HSV-1 і HSV-2 в досліджуваному матеріалі відсутня. Активної герпетичної інфекції в цій зоні немає. При збереженні симптомів – повторний аналіз через 3–5 днів або дослідження іншого біоматеріалу
• «Виявлено» – ДНК вірусу простого герпесу виявлена. Активна реплікація вірусу підтверджена. Потрібна консультація фахівця для призначення лікування – противірусної терапії з урахуванням клінічної ситуації та імунного статусу

Підготовка до аналізу

Спеціальної підготовки не потрібно. Перед забором сечі або зішкріб – утриматися від сечовипускання 1,5–2 години. Жінкам сечу або мазок бажано здавати до початку менструації або через кілька днів після її завершення.

Часті запитання про аналіз ПЛР (зішкріб, сеча, біоптат) до герпесвірусу 1, 2 типу

• Коли краща ПЛР, а коли серологія? ПЛР є кращою при активних висипаннях у перші дні, при імунодефіциті з порушенням вироблення антитіл, при нетипових формах та при офтальмологічному ураженні. Серологія є кращою для оцінки імунного статусу – давності інфікування, наявності довічного імунітету, скринінгу при плануванні вагітності.
• Який матеріал найбільш інформативний при генітальному герпесі з висипаннями? Зішкріб з активних везикул у перші 2–3 дні висипань забезпечує максимальну концентрацію вірусної ДНК. Це оптимальний матеріал за наявності висипань.
• Чи потрібна ПЛР при плануванні вагітності, якщо серологія вже зроблена? Серологія оцінює імунний статус – факт інфікування. ПЛР виявляє активну реплікацію – актуальну вірусну активність. При серопозитивності обидва тести доповнюють один одного. ПЛР при плануванні вагітності виявляє активну інфекцію, що потребує корекції до зачаття.
• Чи може ПЛР бути негативною при реальному герпесі? Так – у період між рецидивами, коли вірус перебуває в латентній формі в нейронах і не реплікується в поверхневих тканинах, ПЛР зішкрібу може бути негативною. ПЛР інформативна саме в період активних висипань або при підозрі на активну системну інфекцію.

ПЛР Real-Time на HSV-1 і HSV-2 у зішкріб, сечі, біоптаті та змиві з кон’юнктиви – найбільш прямий і незалежний від імунного статусу метод підтвердження активної герпетичної інфекції. Широкий вибір біоматеріалів забезпечує діагностику при будь-якій локалізації – від лабіального та генітального герпесу до офтальмологічного ураження. Рання інформативність робить ПЛР методом вибору в гострій фазі, а незалежність від імунної відповіді – незамінним інструментом при імунодефіцитних станах. У МЦ «Альтернатива» аналіз проводиться у складі комплексного обстеження – з консультацією фахівця та інтерпретацією в контексті клінічної картини.

Матеріал для дослідження – зішкріб зі слизової, сеча, біоптат або змив із кон’юнктиви ока залежно від локалізації ураження. Вибір біоматеріалу визначає фахівець на підставі клінічної картини.

Метод дослідження – ПЛР Real-Time (полімеразна ланцюгова реакція в режимі реального часу), якісне визначення. Високочутливий молекулярно-генетичний метод, що виявляє ДНК HSV-1 і HSV-2 при мінімальній концентрації вірусу в матеріалі – інформативний з перших днів клінічних проявів і незалежно від імунного статусу пацієнта.

Термін виконання – 2 робочих дні.

Статті про діагностику та лікування герпесвірусу 1, 2 типу