Описание
Анализ на антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia методом Western Blot является подтверждающим тестом при диагностике болезни Лайма – наиболее точным из доступных серологических методов, применяемым после положительного или сомнительного скринингового ИФА. Western Blot не является методом первичной диагностики – он используется для подтверждения или опровержения положительного скринингового результата, устраняя ложноположительные реакции, характерные для ИФА.
Метод определяет антитела к нескольким специфическим белкам боррелии одновременно – VlsE, р83, р39 (BmpA), р31 (OspA), р30, р25 (OspC), р21, р19, р17 – каждый из которых несёт самостоятельную диагностическую информацию о стадии и активности инфекции. Именно многоантигенный анализ обеспечивает высокую специфичность метода – ложноположительный результат по всему спектру антигенов практически невозможен. МЦ «Альтернатива» применяет Western Blot при необходимости подтверждения диагноза болезни Лайма – в составе двухэтапного серологического алгоритма.
Почему Western Blot применяется после ИФА, а не вместо него
Диагностика болезни Лайма серологическими методами строится по двухэтапному алгоритму – это принципиально важно для понимания роли каждого метода.
- Первый этап – скрининговый ИФА. ИФА на IgG или IgM к боррелии является чувствительным, но недостаточно специфичным методом. Он выявляет большинство инфицированных – но нередко даёт ложноположительные результаты при других спирохетальных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях и некоторых вирусных инфекциях. Положительный или сомнительный ИФА требует подтверждения
- Второй этап – подтверждающий Western Blot. Western Blot разделяет антигены боррелии по молекулярной массе и определяет, к каким именно белкам выработались антитела. Специфичность метода значительно выше ИФА – реакция со специфическими антигенами боррелии, не характерными для других микроорганизмов, исключает большинство ложноположительных результатов
- Логика двухэтапного алгоритма. ИФА – высокочувствительный скрининг, не пропускающий инфицированных. Western Blot – высокоспецифичное подтверждение, исключающее ложноположительные результаты ИФА. При отрицательном ИФА Western Blot не назначается – отрицательный скрининг надёжно исключает инфекцию. При положительном или сомнительном ИФА – Western Blot является обязательным следующим шагом
Что определяет анализ: антигены боррелии и их диагностическое значение
Western Blot одновременно определяет антитела IgG к девяти специфическим белкам Borrelia burgdorferi – каждый из них отражает определённый аспект взаимодействия бактерии с иммунной системой.
- VlsE – основная экспрессированная вариабельная последовательность белка. Один из наиболее диагностически значимых антигенов – высоко экспрессируется при активной инфекции. Антитела к VlsE выявляются как на ранней, так и на поздней стадии. VlsE является надёжным маркером активного боррелиоза – его присутствие в спектре антигенов является весомым диагностическим критерием
- р83 – белок мембранных везикул. Высокомолекулярный белок наружной мембраны боррелии – антитела к р83 характерны преимущественно для поздней стадии болезни Лайма и хронического течения
- р39 (BmpA) – белок связывания металлов. Специфичный антиген боррелии – антитела к р39 выявляются как при ранней, так и при поздней стадии инфекции
- р31 (OspA) – наружный поверхностный белок А. Один из ключевых антигенов боррелии – антитела к OspA нередко появляются при хроническом боррелиозе и при нейроборрелиозе. Является мишенью при вакцинации против боррелиоза
- р25 (OspC) – наружный поверхностный белок С. Антигенный белок, активно экспрессируемый в ранней стадии инфекции при передаче от клеща. Антитела к OspC являются ранним маркером заражения – они появляются в первые недели после инфицирования
- р30, р21, р19, р17 – дополнительные антигены. Белки наружной мембраны и жгутиков боррелии – их совместное выявление в спектре антигенов повышает специфичность диагноза
Показания к назначению анализа на антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia методом Western Blot
Анализ назначается инфекционистом, неврологом, ревматологом или терапевтом.
Основные показания:
- положительный или сомнительный результат скринингового ИФА на антитела к боррелии – обязательный следующий диагностический шаг
- клиническое подозрение на болезнь Лайма при отрицательном ИФА – при выраженных симптомах и эпидемиологическом анамнезе для более точной оценки
- хронический артрит неясной этиологии при наличии эпидемиологического анамнеза
- неврологические симптомы – нейроборрелиоз – при положительном скрининге
- необходимость точного подтверждения диагноза перед длительным курсом антибактериальной терапии
Интерпретация результатов анализа на антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia методом Western Blot
Интерпретация Western Blot на боррелиоз основана на международных критериях – результат считается положительным при выявлении антител к определённому числу специфических антигенов из стандартизированного набора.
- положительный результат. Антитела выявлены к диагностически значимому количеству специфических антигенов боррелии – диагноз болезни Лайма серологически подтверждён. При наличии клинических симптомов – основание для назначения антибактериальной терапии
- отрицательный результат. Антитела не выявлены или выявлены к недостаточному числу антигенов для положительного заключения – диагноз боррелиоза серологически не подтверждён. При сохраняющихся клинических симптомах и эпидемиологическом анамнезе – решение принимает врач с учётом всей клинической картины
- неопределённый результат. Антитела выявлены к части антигенов – недостаточно для однозначного положительного заключения. Требует клинической интерпретации и при необходимости повторного исследования
- принципиальное ограничение. Серология при болезни Лайма является вспомогательным, а не самостоятельным диагностическим инструментом. Диагноз устанавливается только с учётом клинической картины, эпидемиологического анамнеза и серологических данных в совокупности. Отрицательный Western Blot не исключает ранней болезни Лайма при мигрирующей эритеме
Часто задаваемые вопросы об анализе на антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia методом Western Blot
- Нужно ли сдавать Western Blot без предварительного ИФА? Как правило – нет. Western Blot является подтверждающим тестом и применяется после положительного или сомнительного скринингового ИФА. Использование Western Blot как первичного скрининга нецелесообразно с клинической и экономической точки зрения. Исключением является ситуация выраженных клинических симптомов при необходимости максимально точного первичного исследования.
- Может ли Western Blot дать ложноположительный результат? Значительно реже, чем ИФА – именно поэтому он является подтверждающим тестом. Специфичность Western Blot при болезни Лайма является высокой. Тем не менее интерпретация всегда проводится врачом с учётом клинической картины.
- Если Western Blot отрицательный при положительном ИФА – что это означает? Положительный ИФА при отрицательном Western Blot является ложноположительным ИФА – диагноз боррелиоза серологически не подтверждён. Это типичная ситуация при перекрёстных реакциях ИФА с другими инфекциями.
- Выявляет ли Western Blot IgG, какую стадию болезни это отражает? IgG Western Blot отражает хроническую или позднюю стадию болезни Лайма. Для острой стадии более информативен IgM Western Blot – при острых симптомах рекомендуется исследование обоих классов.
- Нужен ли повторный Western Blot после лечения? Western Blot не является оптимальным методом контроля лечения – антитела могут сохраняться длительно после успешной эрадикации. Критерием успешного лечения является клиническое выздоровление. При необходимости серологического контроля динамика уровня антител оценивается через 3–6 месяцев.
Western Blot на антитела IgG к специфическим антигенам Боррелия является подтверждающим тестом высокой специфичности при диагностике болезни Лайма – применяемым после положительного скринингового ИФА для верификации диагноза. Многоантигенный анализ одновременно определяет антитела к девяти специфическим белкам боррелии – VlsE, р83, р39, р31, р30, р25, р21, р19, р17 – обеспечивая точную серологическую картину инфекции. МЦ «Альтернатива» применяет Western Blot как обязательный второй этап серологической диагностики болезни Лайма при положительном ИФА.
Материал для исследования – венозная кровь. Специальной подготовки не требуется.
Метод исследования – Western Blot (иммуноблот). Метод разделяет антигены боррелии по молекулярной массе при электрофорезе и переносит на мембрану для последующего выявления специфических антител IgG к каждому антигену отдельно. Обеспечивает значительно более высокую специфичность по сравнению со скрининговым ИФА.
Срок выполнения – 4 рабочих дня.