Опис
Аналіз на антитіла IgG до специфічних антигенів Borrelia методом Western Blot є підтверджуючим тестом при діагностиці хвороби Лайма – найбільш точним із доступних серологічних методів, що застосовується після позитивного або сумнівного скринінгового ІФА. Western Blot не є методом первинної діагностики – він використовується для підтвердження або спростування позитивного скринінгового результату, усуваючи хибнопозитивні реакції, характерні для ІФА.
Метод визначає антитіла до кількох специфічних білків борелії одночасно – VlsE, р83, р39 (BmpA), р31 (OspA), р30, р25 (OspC), р21, р19, р17 – кожен з яких несе самостійну діагностичну інформацію про стадію та активність інфекції. Саме багатоантигенний аналіз забезпечує високу специфічність методу – хибнопозитивний результат за всім спектром антигенів практично неможливий. МЦ «Альтернатива» застосовує Western Blot за необхідності підтвердження діагнозу хвороби Лайма – у складі двоетапного серологічного алгоритму.
Чому Western Blot застосовується після ІФА, а не замість нього
Діагностика хвороби Лайма серологічними методами будується за двоетапним алгоритмом – це принципово важливо для розуміння ролі кожного методу.
- Перший етап – скринінговий ІФА. ІФА на IgG або IgM до борелії є чутливим, але недостатньо специфічним методом. Він виявляє більшість інфікованих – але нерідко дає хибнопозитивні результати при інших спірохетозах, аутоімунних захворюваннях та деяких вірусних інфекціях. Позитивний або сумнівний ІФА потребує підтвердження
- Другий етап – підтверджуючий Western Blot. Western Blot розділяє антигени борелії за молекулярною масою і визначає, до яких саме білків виробилися антитіла. Специфічність методу значно вища за ІФА – реакція зі специфічними антигенами борелії, не характерними для інших мікроорганізмів, виключає більшість хибнопозитивних результатів
- Логіка двоетапного алгоритму. ІФА – високочутливий скринінг, що не пропускає інфікованих. Western Blot – високоспецифічне підтвердження, що виключає хибнопозитивні результати ІФА. При негативному ІФА Western Blot не призначається – негативний скринінг надійно виключає інфекцію. При позитивному або сумнівному ІФА – Western Blot є обов’язковим наступним кроком
Що визначає аналіз: антигени борелії та їхнє діагностичне значення
Western Blot одночасно визначає антитіла IgG до дев’яти специфічних білків Borrelia burgdorferi – кожен із них відображає певний аспект взаємодії бактерії з імунною системою.
- VlsE – основна експресована варіабельна послідовність білка. Один із найбільш діагностично значущих антигенів – високо експресується при активній інфекції. Антитіла до VlsE виявляються як на ранній, так і на пізній стадії. VlsE є надійним маркером активного бореліозу – його присутність у спектрі антигенів є вагомим діагностичним критерієм
- р83 – білок мембранних везикул. Високомолекулярний білок зовнішньої мембрани борелії – антитіла до р83 характерні переважно для пізньої стадії хвороби Лайма та хронічного перебігу
- р39 (BmpA) – білок зв’язування металів. Специфічний антиген борелії – антитіла до р39 виявляються як при ранній, так і при пізній стадії інфекції
- р31 (OspA) – зовнішній поверхневий білок А. Один із ключових антигенів борелії – антитіла до OspA нерідко з’являються при хронічному бореліозі та при нейробореліозі. Є мішенню при вакцинації проти бореліозу
- р25 (OspC) – зовнішній поверхневий білок С. Антигенний білок, що активно експресується в ранній стадії інфекції при передачі від кліща. Антитіла до OspC є раннім маркером зараження – вони з’являються в перші тижні після інфікування
- р30, р21, р19, р17 – додаткові антигени. Білки зовнішньої мембран та джгутиків борелії – їхнє спільне виявлення в спектрі антигенів підвищує специфічність діагнозу
Показання до призначення аналізу на антитіла IgG до специфічних антигенів Borrelia методом Western Blot
Аналіз призначається інфекціоністом, неврологом, ревматологом або терапевтом.
Основні показання:
- позитивний або сумнівний результат скринінгового ІФА на антитіла до борелії – обов’язковий наступний діагностичний крок;
- клінічна підозра на хворобу Лайма при негативному ІФА – при виражених симптомах та епідеміологічному анамнезі для більш точної оцінки;
- хронічний артрит неясної етіології за наявності епідеміологічного анамнезу;
- неврологічні симптоми – нейробореліоз – при позитивному скринінгу;
- необхідність точного підтвердження діагнозу перед тривалим курсом антибактеріальної терапії.
Інтерпретація результатів аналізу на антитіла IgG до специфічних антигенів Borrelia методом Western Blot
Інтерпретація Western Blot на бореліоз ґрунтується на міжнародних критеріях – результат вважається позитивним при виявленні антитіл до певної кількості специфічних антигенів зі стандартизованого набору.
- позитивний результат. Антитіла виявлені до діагностично значущої кількості специфічних антигенів борелії – діагноз хвороби Лайма серологічно підтверджений. За наявності клінічних симптомів – підстава для призначення антибактеріальної терапії
- негативний результат. Антитіла не виявлені або виявлені до недостатньої кількості антигенів для позитивного висновку – діагноз бореліозу серологічно не підтверджений. При збереженні клінічних симптомів та епідеміологічного анамнезу – рішення приймає лікар з урахуванням усієї клінічної картини
- невизначений результат. Антитіла виявлені до частини антигенів – недостатньо для однозначного позитивного висновку. Потребує клінічної інтерпретації та за необхідності повторного дослідження
- принципове обмеження. Серологія при хворобі Лайма є допоміжним, а не самостійним діагностичним інструментом. Діагноз установлюється тільки з урахуванням клінічної картини, епідемиологічного анамнезу та серологічних даних у сукупності. Негативний Western Blot не виключає ранньої хвороби Лайма при мігруючій еритемі
Часті запитання про аналіз на антитіла IgG до специфічних антигенів Borrelia методом Western Blot
- Чи потрібно здавати Western Blot без попереднього ІФА? Як правило – ні. Western Blot є підтверджуючим тестом і застосовується після позитивного або сумнівного скринінгового ІФА. Використання Western Blot як первинного скринінгу є недоцільним із клінічної та економічної точок зору. Винятком є ситуація виражених клінічних симптомів за необхідності максимально точного первинного дослідження.
- Чи може Western Blot дати хибнопозитивний результат? Значно рідше, ніж ІФА – саме тому він є підтверджуючим тестом. Специфічність Western Blot при хворобі Лайма є високою. Проте інтерпретація завжди проводиться лікарем з урахуванням клінічної картини.
- Якщо Western Blot негативний при позитивному ІФА – що це означає? Позитивний ІФА при негативному Western Blot є хибнопозитивним ІФА – діагноз бореліозу серологічно не підтверджений. Це типова ситуація при перехресних реакціях ІФА з іншими інфекціями.
- Виявляє ли Western Blot IgG, яку стадію хвороби це відображає? IgG Western Blot відображає хронічну або пізню стадію хвороби Лайма. Для гострої стадії більш інформативним є IgM Western Blot – при гострих симптомах рекомендується дослідження обох класів.
- Чи потрібен повторний Western Blot після лікування? Western Blot не є оптимальним методом контролю лікування – антитіла можуть зберігатися тривалий час після успішної ерадикації. Критерієм успішного лікування є клінічне одужання. За необхідності серологічного контролю динаміка рівня антитіл оцінюється через 3–6 місяців.
Western Blot на антитіла IgG до специфічних антигенів Борелія є підтверджуючим тестом високої специфічності при діагностиці хвороби Лайма – що застосовується після позитивного скринінгового ІФА для верифікації діагнозу. Багатоантигенний аналіз одночасно визначає антитіла до дев’яти специфічних білків борелії – VlsE, р83, р39, р31, р30, р25, р21, р19, р17 – забезпечуючи точну серологічну картину інфекції. МЦ «Альтернатива» застосовує Western Blot як обов’язковий другий етап серологічної діагностики хвороби Лайма при позитивному ІФА.
Матеріал для дослідження – венозна кров. Спеціальної підготовки не потрібно.
Метод дослідження – Western Blot (імуноблот). Метод розділяє антигени борелії за молекулярною масою при електрофорезі та переносить на мембрану для подальшого виявлення специфічних антитіл IgG до кожного антигену окремо. Забезпечує значно вищу специфічність порівняно зі скринінговим ІФА.
Термін виконання – 4 робочих дні.
Статті про діагностику та лікування Хвороби Лайма
