Описание
Анализ на антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia методом LineBlot является высокоточным подтверждающим тестом для диагностики острой и ранней стадии болезни Лайма.
Принципиальное отличие этого анализа от стандартного ИФА на IgM состоит в многоантигенном подходе – исследование одновременно определяет антитела к шести специфическим антигенам боррелии, включая OspC трёх различных видов Borrelia: burgdorferi, afzelii и garinii. Это принципиально важно, поскольку в Европе и Украине циркулируют все три вида возбудителя – и анализ, охватывающий OspC каждого из них, значительно повышает чувствительность диагностики ранней инфекции.
Борелиоз, антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia, LineBlot: VlsE Bb: высокоочищенный рекомбинантный антиген VlsE Borrelia burgdoferi; p41: нативный флагелин Borrelia afzelii; p39: нативный BmpA Borrelia afzelii; p25 Ba: OspC наружный поверхностный белок С Borrelia afzelii; p25 Bb: OspC наружный поверхностный белок С Borrelia burgdoferi; p25 Bg: OspC наружный поверхностный белок С Borrelia garinii; метод Western Blot
IgM к боррелии достигают диагностически значимых уровней через 2–3 недели после появления симптомов и остаются информативными на протяжении 1–2 месяцев – именно в этом окне LineBlot IgM является оптимальным инструментом. Метод иммуноблотинга обеспечивает значительно более высокую специфичность по сравнению со скрининговым ИФА – устраняя ложноположительные результаты и давая ответ по каждому антигену отдельно. МЦ «Альтернатива» применяет этот анализ при симптомах острого боррелиоза и при подтверждении положительного скринингового ИФА.
Болезнь Лайма: острая стадия и диагностическое значение IgM
Болезнь Лайма является бактериальной инфекцией, вызываемой спирохетами рода Borrelia. В Европе и на территории Украины основными возбудителями являются три вида – Borrelia burgdorferi, Borrelia afzelii и Borrelia garinii – что определяет необходимость диагностики, охватывающей все три вида.
- клиническая картина острой стадии. Через несколько недель после укуса клеща в месте заражения появляется мигрирующая эритема – округлое красноватое пятно или кольцо с кожей нормального цвета внутри. Эритема способна увеличиваться, охватывать конечность в виде «манжетки» и достигать 15–20 сантиметров в диаметре. Сопутствующие симптомы – головная боль, постоянная усталость, незначительное повышение температуры
- почему ранняя диагностика определяет исход. При своевременной диагностике и антибактериальной терапии на острой стадии – полное выздоровление с высокой вероятностью. При отсутствии лечения развиваются менингит, нейроборрелиоз, поражение суставов, сердца, органов зрения – хроническая стадия, трудно поддающаяся лечению
- кинетика IgM при боррелиозе. Выработка IgM начинается ещё в инкубационном периоде, но диагностически значимая концентрация достигается через 2–3 недели после появления первых симптомов. Максимум – примерно через 1,5 месяца. После этого уровень IgM снижается – и через несколько месяцев они перестают определяться. Именно поэтому LineBlot IgM является оптимальным тестом в течение 1–2 месяцев от начала симптомов
Что такое LineBlot и чем он отличается от ИФА и Western Blot
- LineBlot является разновидностью иммуноблотинга – более совершенной технологией по сравнению со стандартным ИФА. На нитроцеллюлозной мембране нанесены линии высокоочищенных антигенов боррелии – при взаимодействии с сывороткой пациента специфические антитела связываются с соответствующими линиями антигенов
- преимущества перед ИФА. Скрининговый ИФА является чувствительным, но нередко даёт ложноположительные результаты – перекрёстные реакции с другими спирохетами, вирусными инфекциями и аутоиммунными состояниями. LineBlot определяет антитела к каждому специфическому антигену боррелии отдельно – ложноположительная реакция одновременно к нескольким специфическим антигенам практически невозможна
- особенность LineBlot по сравнению с классическим Western Blot. В LineBlot используются высокоочищенные рекомбинантные и нативные антигены – это обеспечивает более чёткую визуализацию результата и стандартизированную интерпретацию по каждой антигенной линии
- место в диагностическом алгоритме. Иммуноблотинг – как LineBlot, так и Western Blot – применяется преимущественно как подтверждающий тест после положительного или сомнительного скринингового ИФА. При выраженной клинической картине и чётком эпидемиологическом анамнезе возможно применение как первичного теста
Антигены в составе анализа и их диагностическое значение
- VlsE Borrelia burgdorferi – высокоочищенный рекомбинантный антиген, основная экспрессированная вариабельная белковая последовательность. Один из наиболее диагностически значимых антигенов – активно экспрессируется при активной инфекции. Антитела к VlsE появляются как при ранней, так и при поздней стадии
- p41 – нативный флагелин Borrelia afzelii. Белок жгутикового аппарата боррелии – один из первых антигенов, на который реагирует иммунная система. Антитела к p41 нередко появляются рано – но имеют ограниченную специфичность из-за возможных перекрёстных реакций с флагелинами других бактерий. Оценивается в совокупности с другими антигенами
- p39 (BmpA) – нативный BmpA Borrelia afzelii. Специфичный белок связывания металлов наружной мембраны боррелии. Антитела к p39 характерны для боррелиоза и повышают специфичность диагноза при совместном выявлении с другими маркерами
- p25 Ba (OspC Borrelia afzelii), p25 Bb (OspC Borrelia burgdorferi), p25 Bg (OspC Borrelia garinii) – наружный поверхностный белок С трёх видов боррелии. OspC является ведущим антигеном ранней стадии инфекции – активно экспрессируется в период передачи бактерии от клеща и в первые недели инфекции. Антитела к OspC являются самым ранним и наиболее информативным маркером острого боррелиоза. Включение OspC всех трёх видов боррелии принципиально для территорий с циркуляцией нескольких видов возбудителя – что характерно для Украины и Европы
Показания к назначению анализа на антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia методом LineBlot
Анализ назначается инфекционистом, неврологом, ревматологом, терапевтом или педиатром.
Основные показания:
- положительный или сомнительный скрининговый ИФА на IgM к боррелии – подтверждающий тест
- симптомы острой болезни Лайма при наличии эпидемиологического анамнеза – в первые 1–2 месяца от появления симптомов
- мигрирующая эритема после укуса клеща при необходимости серологического подтверждения
- выявленный укус клеща с длительным контактом и последующим появлением симптомов
- контроль эффективности антибактериальной терапии острого боррелиоза
Важное ограничение по срокам. Анализ является оптимальным в течение 1–2 месяцев от начала симптомов – в период максимального уровня IgM. При хроническом боррелиозе с давними симптомами предпочтителен IgG LineBlot или пакет №53 с одновременным определением IgM и IgG.
Интерпретация результатов анализа на антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia методом LineBlot
По каждому антигену отдельно отмечается результат на основании интенсивности окрашивания.
- 0–11 – отрицательный результат по антигену. Антитела IgM к данному антигену не выявлены в диагностически значимом количестве
- 12–18 – сомнительный результат. Требует повторного исследования через 2–3 недели или дополнительных методов
- 19–256 – положительный результат. Антитела IgM к данному антигену выявлены – указывает на активную инфекцию боррелиозом
Клиническая интерпретация спектра. Наиболее характерными для ранней острой стадии являются антитела к OspC (p25) – их выявление к одному или нескольким видам OspC является весомым маркером острого боррелиоза. Положительный VlsE при острых симптомах дополнительно подтверждает диагноз. Положительный p41 при отрицательных остальных антигенах оценивается с осторожностью – возможны перекрёстные реакции.
Часто задаваемые вопросы об анализе на антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia методом LineBlot
- Почему в анализе исследуется OspC трёх разных видов боррелии? На территории Украины и Европы циркулируют три вида боррелии – Borrelia burgdorferi, afzelii и garinii. OspC каждого вида имеет несколько отличающуюся структуру – антитела к OspC одного вида могут не реагировать с OspC другого. Исследование OspC всех трёх видов охватывает всех возможных возбудителей и значительно повышает чувствительность ранней диагностики.
- Когда оптимально сдавать этот анализ после укуса клеща? Оптимально через 2–3 недели после появления первых симптомов или через 3–4 недели после укуса при отсутствии симптомов. Сдача в первые дни даст отрицательный результат даже при заражении – антитела ещё не достигли диагностически значимого уровня.
- Если IgM LineBlot отрицательный при мигрирующей эритеме – нужно ли лечение? Да – мигрирующая эритема является клиническим основанием для диагноза и немедленного начала антибактериальной терапии без ожидания серологического подтверждения. Отрицательный IgM в первые 2 недели не исключает ранней инфекции.
- Может ли IgM LineBlot заменить пакет №53 с IgM+IgG? IgM LineBlot оптимален при острой стадии – в первые 1–2 месяца. При более длительных симптомах и подозрении на хроническую стадию предпочтителен пакет №53, одновременно оценивающий оба класса антител.
- Нужен ли предварительный ИФА перед LineBlot? Стандартный диагностический алгоритм предполагает ИФА первым этапом с последующим подтверждением иммуноблотом. При выраженных симптомах и чётком эпидемиологическом анамнезе возможно непосредственное назначение LineBlot как более информативного теста.
Анализ на антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia методом LineBlot является высокоточным подтверждающим тестом для диагностики острой и ранней болезни Лайма – охватывая шесть специфических антигенов боррелии, включая OspC трёх видов возбудителя, циркулирующих на территории Украины и Европы. Многоантигенный иммуноблотинг обеспечивает значительно более высокую специфичность по сравнению со скрининговым ИФА – устраняя ложноположительные результаты и давая диагностически значимый ответ по каждому антигену отдельно. МЦ «Альтернатива» применяет этот анализ при симптомах острого боррелиоза и при подтверждении положительного скринингового ИФА на IgM к боррелии.
Материал для исследования – сыворотка крови. Специальной подготовки не требуется.
Метод исследования – иммуноблотинг (LineBlot). Высокоочищенные рекомбинантные и нативные антигены боррелии нанесены на мембрану отдельными линиями – специфические антитела IgM выявляются к каждому антигену индивидуально.
Срок выполнения – 4 рабочих дня.