Опис
Аналіз на антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia методом LineBlot є високоточним підтверджуючим тестом для діагностики гострої та ранньої стадії хвороби Лайма.
Принципова відмінність цього аналізу від стандартного ІФА на IgM полягає в багатоантигенному підході – дослідження одночасно визначає антитіла до шести специфічних антигенів борелії, включаючи OspC трьох різних видів Borrelia: burgdorferi, afzelii та garinii. Це принципово важливо, оскільки в Європі та Україні циркулюють усі три види збудника – і аналіз, що охоплює OspC кожного з них, значно підвищує чутливість діагностики ранньої інфекції.
Бореліоз, антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia, LineBlot: VlsE Bb: високоочищений рекомбінантний антиген VlsE Borrelia burgdoferi; p41: нативний флагелін Borrelia afzelii; p39: нативний BmpA Borrelia afzelii; p25 Ba: OspC зовнішній поверхневий білок С Borrelia afzelii; p25 Bb: OspC зовнішній поверхневий білок С Borrelia burgdoferi; p25 Bg: OspC зовнішній поверхневий білок С Borrelia garinii; метод Western Blot
IgM до борелії досягають діагностично значущих рівнів через 2–3 тижні після появи симптомів і залишаються інформативними протягом 1–2 місяців – саме в цьому вікні LineBlot IgM є оптимальним інструментом. Метод імуноблотингу забезпечує значно вищу специфічність порівняно зі скринінговим ІФА – усуваючи хибнопозитивні результати та даючи відповідь щодо кожного антигену окремо. МЦ «Альтернатива» застосовує цей аналіз при симптомах гострого бореліозу та при підтвердженні позитивного скринінгового ІФА.
Хвороба Лайма: гостра стадія та діагностичне значення IgM
Хвороба Лайма є бактеріальною інфекцією, що викликається спірохетами роду Borrelia. У Європі та на території України основними збудниками є три види – Borrelia burgdorferi, Borrelia afzelii та Borrelia garinii – що визначає необхідність діагностики, яка охоплює всі три види.
- клінічна картина гострої стадії. Через кілька тижнів після укусу кліща в місці зараження з’являється мігруюча еритема – округла червонувата пляма або кільце з шкірою нормального кольору всередині. Еритема здатна збільшуватися, охоплювати кінцівку у вигляді «манжетки» і досягати 15–20 сантиметрів у діаметрі. Супутні симптоми – головний біль, постійна втома, незначне підвищення температури
- чому рання діагностика визначає результат. При своєчасній діагностиці та антибактеріальній терапії на гострій стадії – повне одужання з високою ймовірністю. За відсутності лікування розвиваються менінгіт, нейробореліоз, ураження суглобів, серця, органів зору – хронічна стадія, яка важко піддається лікуванню
- кінетика IgM при бореліозі. Вироблення IgM починається ще в інкубаційному періоді, але діагностично значуща концентрація досягається через 2–3 тижні після появи перших симптомів. Максимум – приблизно через 1,5 місяця. Після цього рівень IgM знижується – і через кілька місяців вони перестають визначатися. Саме тому LineBlot IgM є оптимальним тестом протягом 1–2 місяців від початку симптомів
Що таке LineBlot і чим він відрізняється від ІФА та Western Blot
- LineBlot є різновидом імуноблотингу – більш досконалою технологією порівняно зі стандартним ІФА. На нітроцелюлозну мембрану нанесені лінії високоочищених антигенів борелії – при взаємодії з сироваткою пацієнта специфічні антитіла зв’язуються з відповідними лініями антигенів
- переваги перед ІФА. Скринінговий ІФА є чутливим, але нерідко дає хибнопозитивні результати – перехресні реакції з іншими спірохетами, вірусними інфекціями та аутоімунними станами. LineBlot визначає антитіла до кожного специфічного антигену борелії окремо – хибнопозитивна реакція одночасно до кількох специфічних антигенів практично неможлива
- особливість LineBlot порівняно з класичним Western Blot. У LineBlot використовуються високоочищенні рекомбінантні та нативні антигени – це забезпечує більш чітку візуалізацію результату та стандартизовану інтерпретацію щодо кожної антигенної лінії
- місце в діагностичному алгоритмі. Імуноблотинг – як LineBlot, так і Western Blot – застосовується переважно як підтверджуючий тест після позитивного або сумнівного скринінгового ІФА. При вираженій клінічній картині та чіткому епідеміологічному анамнезі можливе застосування як первинного тесту
Антигени у складі аналізу та їхнє діагностичне значення
- VlsE Borrelia burgdorferi – високоочищений рекомбінантний антиген, основна експресована варіабельна білкова послідовність. Один із найбільш діагностично значущих антигенів – активно експресується при активній інфекції. Антитіла до VlsE з’являються як при ранній, так і при пізній стадії
- p41 – нативний флагелін Borrelia afzelii. Білок джгутикового апарату борелії – один із перших антигенів, на який реагує імунна система. Антитіла до p41 нерідко з’являються рано – але мають обмежену специфічність через можливі перехресні реакції з флагелінами інших бактерій. Оцінюється в сукупності з іншими антигенами
- p39 (BmpA) – нативний BmpA Borrelia afzelii. Специфічний білок зв’язування металів зовнішньої мембрани борелії. Антитіла до p39 характерні для бореліозу і підвищують специфічність діагнозу при спільному виявленні з іншими маркерами
- p25 Ba (OspC Borrelia afzelii), p25 Bb (OspC Borrelia burgdorferi), p25 Bg (OspC Borrelia garinii) – зовнішній поверхневий білок С трьох видів борелії. OspC є провідним антигеном ранньої стадії інфекції – активно експресується в період передачі бактерії від кліща та в перші тижні інфекції. Антитіла до OspC є найбільш раннім і найбільш інформативним маркером гострого бореліозу. Включення OspC усіх трьох видів борелії є принциповим для територій із циркуляцією кількох видів збудника – що характерно для України та Європи
Показання до призначення аналізу на антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia методом LineBlot
Аналіз призначається інфекціоністом, неврологом, ревматологом, терапевтом або педіатром.
Основні показання:
- позитивний або сумнівний скринінговий ІФА на IgM до борелії – підтверджуючий тест;
- симптоми гострої хвороби Лайма за наявності епідеміологічного анамнезу – у перші 1–2 місяці від появи симптомів;
- мігруюча еритема після укусу кліща за необхідності серологічного підтвердження;
- виявлений укус кліща з тривалим контактом і подальшим появою симптомів;
- контроль ефективності антибактеріальної терапії гострого бореліозу.
Важливе обмеження щодо термінів. Аналіз є оптимальним протягом 1–2 місяців від початку симптомів – у період максимального рівня IgM. При хронічному бореліозі з давніми симптомами переважним є IgG LineBlot або пакет №53 з одночасним визначенням IgM та IgG.
Інтерпретація результатів аналізу на антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia методом LineBlot
По кожному антигену окремо зазначається результат на підставі інтенсивності забарвлення.
- 0–11 – негативний результат по антигену. Антитіла IgM до даного антигену не виявлені в діагностично значущій кількості
- 12–18 – сумнівний результат. Потребує повторного дослідження через 2–3 тижні або додаткових методів
- 19–256 – позитивний результат. Антитіла IgM до даного антигену виявлені – вказує на активну інфекцію бореліозом
Клінічна інтерпретація спектра. Найбільш характерними для ранньої гострої стадії є антитіла до OspC (p25) – їх виявлення до одного або кількох видів OspC є вагомим маркером гострого бореліозу. Позитивний VlsE при гострих симптомах додатково підтверджує діагноз. Позитивний p41 при негативних інших антигенах оцінюється з обережністю – можливі перехресні реакції.
Часті запитання про аналіз на антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia методом LineBlot
- Чому в аналізі досліджується OspC трьох різних видів борелії? На території України та Європи циркулюють три види борелії – Borrelia burgdorferi, afzelii та garinii. OspC кожного виду має структуру, що дещо відрізняється – антитіла до OspC одного виду можуть не реагувати з OspC іншого. Дослідження OspC усіх трьох видів охоплює всіх можливих збудників і значно підвищує чутливість ранньої діагностики.
- Коли оптимально здавати цей аналіз після укусу кліща? Оптимально через 2–3 тижні після появи перших симптомів або через 3–4 тижні після укусу за відсутності симптомів. Здача в перші дні дасть негативний результат навіть при зараженні – антитіла ще не досягли діагностично значущого рівня.
- Якщо IgM LineBlot негативний при мігруючій еритемі – чи потрібне лікування? Так – мігруюча еритема є клінічною підставою для діагнозу та негайного початку антибактеріальної терапії без очікування серологічного підтвердження. Негативний IgM у перші 2 тижні не виключає ранньої інфекції.
- Чи може IgM LineBlot замінити пакет №53 з IgM+IgG? IgM LineBlot оптимальний при гострій стадії – у перші 1–2 місяці. При більш тривалих симптомах і підозрі на хронічну стадію переважним є пакет №53, який одночасно оцінює обидва класи антитіл.
- Чи потрібен попередній ІФА перед LineBlot? Стандартний діагностичний алгоритм передбачає ІФА першим етапом з подальшим підтвердженням імуноблотом. При виражених симптомах та чіткому епідеміологічному анамнезі можливе безпосереднє призначення LineBlot як більш інформативного тесту.
Аналіз на антитіла IgM до специфічних антигенів Borrelia методом LineBlot є високоточним підтверджуючим тестом для діагностики гострої та ранньої хвороби Лайма – охоплюючи шість специфічних антигенів борелії, включаючи OspC трьох видів збудника, що циркулюють на території України та Європи. Багатоантигенний імуноблотинг забезпечує значно вищу специфічність порівняно зі скринінговим ІФА – усуваючи хибнопозитивні результати та даючи діагностично значущу відповідь по кожному антигену окремо. МЦ «Альтернатива» застосовує цей аналіз при симптомах гострого бореліозу та при підтвердженні позитивного скринінгового ІФА на IgM до борелії.
Матеріал для дослідження – сироватка крові. Спеціальної підготовки не потрібно.
Метод дослідження – імуноблотинг (LineBlot). Високоочищені рекомбінантні та нативні антигени борелії нанесені на мембрану окремими лініями – специфічні антитіла IgM виявляються до кожного антигену індивідуально.
Термін виконання – 4 робочих дні.
Статті про діагностику та лікування Хвороби Лайма
