Опис
Мультиплексна полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) на кліщові інфекції – панельний тест, який одночасно виявляє чотирьох найбільш клінічно значущих збудників кліщових інфекцій з одного зразка. Це принципова перевага перед стандартним підходом, за якого кожного збудника досліджують окремим тестом: один кліщ може нести кілька патогенів одночасно, а клінічна картина коінфекції нерідко атипова і не дозволяє «вгадати» потрібний аналіз заздалегідь. Мультиплексна ПЛР вирішує цю проблему – за одне дослідження, з одного зразка, у мінімальні терміни.
Іксодові кліщі (Ixodes ricinus та Ixodes persulcatus) є одночасними переносниками кількох патогенів. За даними європейських досліджень, в ендемічних районах до 25-30% кліщів заражені Borrelia burgdorferi, 2-4% – вірусом кліщового енцефаліту, 1-3% – Anaplasma phagocytophilum. Коінфекція двома і більше збудниками в одного кліща виявляється у 5-15% випадків – і саме такі ситуації створюють найбільші діагностичні труднощі при стандартному поетапному обстеженні.
Що визначає мультиплексна ПЛР на кліщові інфекції: чотири збудники
Вірус кліщового енцефаліту (TBEV – Tick-borne encephalitis virus)
РНК-вірус із родини Flaviviridae. Найнебезпечніший із чотирьох збудників – єдиний вірусний агент у панелі, специфічної противірусної терапії не існує, лікування симптоматичне. Кліщовий енцефаліт уражає центральну нервову систему (ЦНС) і може залишати стійкі неврологічні наслідки (паралічі, парези, деменція) або призводити до летального наслідку (летальність при тяжкій формі до 20-40% без інтенсивної терапії).
Клінічний перебіг двофазний: перша фаза – грипоподібна (лихоманка 38-39°C, міалгії, головний біль, 3-7 днів) – у 70-80% пацієнтів закінчується одужанням. У 20-30% після короткочасного покращення настає друга фаза – менінгіт, менінгоенцефаліт, поліомієлітоподібний синдром. Саме в період між фазами ПЛР-дослідження плазми крові на вірус кліщового енцефаліту найбільш інформативне.
Важливо: TBEV – єдиний із чотирьох збудників, проти якого існує вакцина. Своєчасна вакцинація (3 дози) забезпечує надійний захист.
Borrelia burgdorferi sensu lato (бореліоз, хвороба Лайма)
Спірохета – збудник хвороби Лайма. Найпоширеніша кліщова інфекція в Україні та Європі. На відміну від кліщового енцефаліту, піддається повному виліковуванню антибіотиками за ранньої діагностики. Клінічні форми: мігруюча еритема (70% випадків), а за відсутності лікування – дисемінація з ураженням суглобів (артрит Лайма), нервової системи (нейробореліоз), серця (блокади). Хронічний бореліоз вкрай важко піддається лікуванню.
У мультиплексній панелі виявляються всі патогенні геновиди комплексу B. burgdorferi sensu lato (B. burgdorferi s.s., B. afzelii, B. garinii), характерні для Європи.
Anaplasma phagocytophilum (гранулоцитарний анаплазмоз людини, ГАЛ)
Облігатний внутрішньоклітинний грамнегативний бактеріальний патоген. Паразитує всередині нейтрофілів та еозинофілів, що принципово відрізняє його від більшості бактерій. Саме ця особливість пояснює нетипову лабораторну картину: замість очікуваного лейкоцитозу при бактеріальній інфекції – лейкопенія та тромбоцитопенія, характерні радше для вірусних інфекцій.
Клініка ГАЛ: гострий початок із високою лихоманкою (38,5-40°C), інтенсивним головним болем, міалгіями, іноді нудотою. Висип нетиповий (на відміну від ерліхіозу). Лабораторно: лейкопенія, тромбоцитопенія, підвищення трансаміназ (печінкових ферментів АЛТ та АСТ). При тяжкому перебігу – дихальна недостатність, ниркова недостатність, неврологічні порушення. Летальність без лікування в імунокомпрометованих пацієнтів – до 5-10%.
Лікування: доксициклін ефективний, хоча анаплазми є внутрішньоклітинними патогенами. Серологічна діагностика ускладнена в гостру фазу – антитіла формуються пізно. Саме тому ПЛР є методом вибору для ранньої діагностики анаплазмозу.
Ehrlichia chaffeensis / E. muris (моноцитарний ерліхіоз людини, МЕЛ)
Облігатний внутрішньоклітинний патоген, споріднений з Anaplasma, але паразитує в моноцитах, а не в нейтрофілах. У Європі E. muris трапляється рідше, ніж E. chaffeensis у США, однак випадки захворювання реєструються.
Клініка МЕЛ багато в чому нагадує анаплазмоз: лихоманка, головний біль, міалгії. Відмінна риса – макулопапульозний висип трапляється частіше (у 30% дорослих і 60% дітей), що нерідко помилково розцінюють як алергічну реакцію. Лабораторно: лейкопенія, тромбоцитопенія, підвищення трансаміназ. Специфічна морфологічна ознака – шовковицеподібні тільця (морули) у вакуолях моноцитів при дослідженні мазка крові. Лікування – доксициклін.
Клінічна значущість коінфекції кліщовими інфекціями
Коінфекція – одночасне зараження кількома кліщовими патогенами – є не рідкісним винятком, а закономірністю в ендемічних регіонах. Її клінічне значення величезне:
- Тяжчий перебіг – коінфекція TBEV + Borrelia або Anaplasma + Borrelia перебігає значно тяжче, ніж кожна інфекція окремо
- Атипова картина – симптоми кількох інфекцій накладаються одна на одну, створюючи нетипову клінічну картину, яка не відповідає жодному класичному опису
- Діагностичні пастки – лікування одного збудника при невиявленому другому призводить до часткового покращення та подальшого погіршення, що нерідко трактують як «резистентність» або «хронічну форму»
- Принципово різна тактика – антибіотики (доксициклін) ефективні проти Borrelia, Anaplasma та Ehrlichia, але безсилі проти вірусу кліщового енцефаліту; при коінфекції TBEV + Borrelia антибіотики необхідні, але основною загрозою залишається вірусний енцефаліт
Показання до мультиплексної ПЛР на кліщові інфекції
- Одразу після видалення кліща – дослідження кліща для оцінки його інфікованості та ухвалення рішення щодо профілактики ще до появи симптомів
- Лихоманка після укусу кліща – будь-яке підвищення температури протягом 1-30 днів після укусу потребує виключення кліщових інфекцій, а мультиплексна ПЛР дозволяє одночасно перевірити всі основні варіанти
- Неможливість клінічної диференціації – симптоми кліщових інфекцій (лихоманка, головний біль, міалгії, артралгії) перетинаються між собою та зі звичайними гострими респіраторними вірусними інфекціями (ГРВІ)
- Підозра на анаплазмоз або ерліхіоз – лейкопенія, тромбоцитопенія та підвищення трансаміназ після укусу кліща; серологічні тести на ці інфекції в гострій фазі ненадійні, ПЛР є методом вибору
- Атиповий або тяжкий перебіг після укусу кліща – неврологічні симптоми, тяжка лихоманка, поліорганне ураження, коли виключення коінфекції обов’язкове
- Диференційна діагностика – лейкопенія та тромбоцитопенія невстановленої етіології в пацієнтів із ризиком укусу кліща
- Імунокомпрометовані пацієнти – при ВІЛ-інфекції, онкологічних захворюваннях, імуносупресивній терапії кліщові інфекції перебігають тяжче і потребують ранньої діагностики
Інтерпретація результату мультиплексної ПЛР на кліщові інфекції
Для кожного з чотирьох збудників результат якісний: «виявлено» або «не виявлено». У таблиці вказано лише збудників, яких виявлено, – решта не виявлені.
| Виявлено | Інтерпретація і тактика |
|---|---|
| Жодного збудника | Жоден із 4 збудників не виявлений. За наявності симптомів – серологічне спостереження, повторна ПЛР через 7-10 днів |
| TBEV | Кліщовий енцефаліт. Госпіталізація, симптоматичне лікування, неврологічний моніторинг |
| Borrelia | Бореліоз. Доксициклін 21 день (рання форма) або цефтріаксон (нейробореліоз, артрит) |
| Anaplasma | Анаплазмоз. Доксициклін 10-14 днів, моніторинг показників крові |
| Ehrlichia | Ерліхіоз. Доксициклін 14 днів |
| TBEV + Borrelia | Коінфекція. Антибіотики проти бореліозу + симптоматичне лікування енцефаліту, госпіталізація |
| Borrelia + Anaplasma | Коінфекція. Доксициклін ефективний проти обох збудників, подовжений курс |
Діагностика та лікування кліщових інфекцій у МЦ «Альтернатива»
МЦ «Альтернатива» надає повний спектр допомоги після укусу кліща – від видалення кліща до лікування виявленої інфекції.
Одразу після видалення кліща в МЦ «Альтернатива» проводиться обколювання місця укусу озоно-кисневою сумішшю – пряма бактерицидна та противірусна дія в зоні інокуляції, яка знижує ризик поширення збудників організмом ще до отримання результатів ПЛР. Комплексна діагностика кліщових інфекцій у МЦ «Альтернатива» включає мультиплексну ПЛР, серологічні тести та спостереження в динаміці.
При підтвердженому кліщовому бореліозі проводиться антибактеріальна терапія в поєднанні з внутрішньовенною озонотерапією – вона покращує оксигенацію тканин, активує клітинний імунітет проти внутрішньоклітинних патогенів (Anaplasma, Ehrlichia) і чинить противірусну дію. При кліщовому енцефаліті симптоматична підтримувальна терапія доповнюється детоксикацією та нейропротекторними заходами.
Небезпека укусу кліща – не лише в чотирьох збудниках цієї панелі: той самий кліщ може нести бабезіоз, туляремію, плямисту гарячку. Скринінг на апаратно-програмному комплексі «Комплекс Медичний Експертний» (КМЕ) допомагає оцінити весь спектр інфекційного навантаження. Пацієнти МЦ «Альтернатива», які пройшли лікування кліщових інфекцій, відзначають ефективність комплексного підходу – поєднання антибактеріальної терапії з детоксикацією та озонотерапією. При хронічному бореліозі з неврологічними наслідками додатково проводиться спеціалізована програма відновлення нервової системи.
Підготовка до мультиплексної ПЛР на кліщові інфекції
Дослідження кліща
- Видалення – витягти кліща пінцетом перпендикулярно до шкіри, захопивши ближче до ротового апарату, без розчавлювання, припікання, змащування олією
- Зберігання – помістити в герметичний контейнер із вологим ватним диском (не заливати водою, не заморожувати)
- Доставка – доставити в лабораторію протягом 24-48 годин за кімнатної температури або +4°C
- Дані – вказати дату та місце ймовірного укусу, регіон
Дослідження плазми крові
- Підготовка – спеціальна підготовка не потрібна
- Антибіотики – повідомити лікаря про їх прийом, оскільки вони знижують концентрацію ДНК бактерій у крові
- Матеріал – плазма крові з ЕДТА (етилендіамінтетраоцтовою кислотою)
- Час забору – оптимально через 5-14 днів після укусу
Матеріал для дослідження: кліщ або плазма крові з вени.
Метод дослідження: мультиплексна ПЛР у реальному часі (Real-Time) – одночасне виявлення 4 збудників.
Термін готовності: 3 робочі дні.
Часті запитання про мультиплексну ПЛР на кліщові інфекції
Чим мультиплексна ПЛР краща за окремі аналізи на кожного збудника?
При одному укусі кліщ може нести кілька патогенів одночасно. Замовляти 4 окремі аналізи – дорожче, довше і потребує більшого об’єму матеріалу. Мультиплексна ПЛР дає відповідь щодо всіх 4 збудників одночасно з одного зразка за одне дослідження. Це особливо важливо при дослідженні кліща, який є в єдиному екземплярі.
Якщо мультиплексна ПЛР негативна – кліщ точно був незараженим?
При дослідженні кліща негативний результат означає, що жоден із 4 збудників не виявлений за даної чутливості методу. Кліщ може нести інші патогени, що не входять до панелі (бабезії, збудник туляремії, плямистої гарячки). При дослідженні крові пацієнта негативний результат не виключає зараження, якщо з моменту укусу минуло менше 5 днів або збудник уже залишив кровотік і локалізувався в тканинах.
Чи потрібна серологія додатково до ПЛР?
Так, обидва методи доповнюють один одного. ПЛР найбільш інформативна в перші 2-4 тижні (гостра фаза). Серологічні тести – імуноферментний аналіз (ІФА) та імуноблот Western Blot – застосовують при хронічних формах, пізній діагностиці та для ретроспективного підтвердження діагнозу.
Через скільки днів після укусу здавати кров на мультиплексну ПЛР?
Оптимально – через 5-14 днів від укусу. Занадто рано (перші 1-3 дні) концентрація збудників у крові ще не досягає рівня, що виявляється. Через 4-6 тижнів більшість збудників дисемінують у тканини, і чутливість ПЛР крові знижується.
Здати аналіз мультиплексною ПЛР на кліщові інфекції в МЦ «Альтернатива»
Мультиплексна ПЛР на кліщові інфекції за одне дослідження виявляє вірус кліщового енцефаліту, борелії, анаплазми та ерліхії з одного зразка – кліща або плазми крові. Це дозволяє швидко виявити коінфекцію, яка часто перебігає атипово, і одразу обрати правильну тактику лікування.
Якщо вас укусив кліщ або після укусу з’явилися лихоманка, слабкість, головний біль чи висип, зверніться до МЦ «Альтернатива». Лікар допоможе видалити кліща, призначить потрібні дослідження та за потреби підбере комплексне лікування виявленої інфекції.