Опис
Аналіз на хелікобактер методом ПЛР Real-Time є найбільш точним з доступних методів діагностики інфекції Helicobacter pylori – виявляючи ДНК бактерії безпосередньо в біологічному матеріалі з чутливістю, недосяжною для серологічних методів та зіставною з інвазивними дослідженнями. На відміну від аналізів на антитіла – IgG, IgA, IgM – ПЛР визначає не імунну відповідь організму на бактерію, а саму бактерію. Це принципова відмінність: антитіла можуть зберігатися після успішного лікування, можуть не виробитися при імунодефіциті – ПЛР позбавлена цих обмежень.
Метод застосовується як при первинній діагностиці, так і для контролю ефективності ерадикаційної терапії – при цьому результат не залежить від стану імунної системи пацієнта, давності інфікування або стадії інфекційного процесу. Матеріалом для дослідження може слугувати кал, біоптат слизової шлунка та інші біологічні зразки – що робить метод застосовним як без гастроскопії, так і в її рамках. МЦ «Альтернатива» призначає ПЛР-діагностику хелікобактера при симптомах гастриту та виразкової хвороби – як самостійно, так і у складі комплексного гастроентерологічного обстеження.
Що таке ПЛР Real-Time і чому цей метод точніший за серологічні
ПЛР – полімеразна ланцюгова реакція – є молекулярно-біологічним методом, що виявляє специфічні ділянки ДНК збудника в досліджуваному зразку. Real-Time – формат ПЛР з реєстрацією результату в режимі реального часу – дозволяє не лише виявити присутність ДНК, а й оцінити її кількість за необхідності.
Принцип методу. У зразку біологічного матеріалу – калі або біоптаті – виділяється ДНК. За допомогою специфічних праймерів, комплементарних унікальним ділянкам геному хелікобактера, проводиться багаторазове копіювання цільового фрагмента. За наявності ДНК бактерії в зразку – копіювання відбувається, результат позитивний. За її відсутності – реакція не йде, результат негативний.
Чому ПЛР точніша за серологічні методи:
Серологічні методи – IgG, IgA, IgM – залежать від нормальної імунної відповіді пацієнта. При імунодефіциті, в ранній фазі зараження або після успішного лікування антитіла можуть давати хибні результати. ПЛР не залежить від імунного статусу – вона виявляє ДНК незалежно від того, чи виробив організм антитіла. Чутливість ПЛР при дослідженні калу становить 90-95%, біоптату – до 98%.
Якісне визначення. Даний формат аналізу дає однозначну відповідь – ДНК хелікобактера виявлена або не виявлена. Це достатньо для діагностики присутності інфекції та для контролю ефективності лікування.
Показання до призначення аналізу ПЛР (кал, біоптат зі слизової шлунка та ін) до хелікобактера
Аналіз призначається гастроентерологом, терапевтом або педіатром.
Первинна діагностика:
- симптоми гастриту – важкість після їжі, печія, нудота, болі в епігастрії, здуття
- симптоми дуоденіту або виразкової хвороби – голодні болі, нічні болі у верхній частині живота
- неприємний запах з рота без стоматологічної причини
- обстеження при виявленні хелікобактера у близьких родичів
Уточнювальна діагностика:
- негативний серологічний результат за наявності симптомів – ПЛР виявляє інфекцію там, де антитіла не є інформативними
- імунодефіцит – при якому серологічні тести є ненадійними
- необхідність підтвердження перед призначенням ерадикаційної терапії
Контроль ефективності лікування:
- оцінка успішності ерадикаційної терапії – ПЛР є одним із найбільш точних методів контролю; проводиться не раніше ніж через 4 тижні після закінчення курсу
Матеріал для дослідження та особливості взяття
- кал. Найбільш доступний матеріал – не вимагає інвазивних процедур. Збирається в стерильний контейнер. Відображає актуальну присутність бактерії в шлунково-кишковому тракті
- біоптат слизової шлунка. Береться при гастроскопії – забезпечує найвищу чутливість методу. Дозволяє одночасно провести гістологічне дослідження та оцінити стан слизової
- інші біологічні матеріали. За необхідності дослідження може проводитися з інших зразків – залежно від клінічного завдання
- підготовка. За 2 тижні до дослідження бажано виключити приймання антибіотиків та препаратів бісмуту. За 3-5 днів – інгібіторів протонної помпи, що знижують концентрацію бактерії в зразку та потенційно впливають на результат
Інтерпретація результатів аналізу ПЛР (кал, біоптат зі слизової шлунка та ін) до хелікобактера
Аналіз є якісним – можливі два результати.
- позитивний результат. ДНК Helicobacter pylori виявлена – бактерія присутня в досліджуваному матеріалі. За наявності симптомів гастриту або виразки – підстава для призначення ерадикаційної терапії. При контролі після лікування – ерадикація не досягнута, потрібна корекція схеми терапії
- негативний результат. ДНК хелікобактера не виявлена. При первинній діагностиці – інфекція малоймовірна. При контролі після лікування – ерадикація успішна. При збережених симптомах та негативному ПЛР – слід розглянути інші причини гастриту
Перевага ПЛР при контролі лікування. Серологічні методи при контролі лікування оцінюють динаміку зниження антитіл – процес повільний та неоднозначний. ПЛР дає чітку відповідь уже через 4 тижні після закінчення курсу – ДНК бактерії є чи немає.
Часті запитання про аналіз ПЛР (кал, біоптат зі слизової шлунка та ін) до хелікобактера
- Чим ПЛР краща за аналіз калу на антиген для діагностики хелікобактера? Обидва методи є прямими – виявляють бактерію, а не антитіла. ПЛР виявляє ДНК збудника, аналіз на антиген – його білкові молекули. За чутливістю методи зіставні. ПЛР має перевагу при необхідності дослідження біоптату та при необхідності одночасного визначення чутливості до антибіотиків у розширеному форматі.
- Чи можна здавати ПЛР під час прийому інгібіторів протонної помпи? Небажано – ці препарати знижують концентрацію бактерії в шлунку та можуть вплинути на результат при дослідженні калу. При неможливості відміни – результат інтерпретується з урахуванням цього обмеження.
- Через скільки днів після зараження ПЛР стає позитивною? ПЛР стає позитивною за наявності достатньої кількості бактерії в зразку – як правило, через 1-2 тижні після заражeння. На відміну від серологічних методів, не вимагає часу на вироблення антитіл.
- Чи виявляє ПЛР резистентність хелікобактера до антибіотиків? Стандартний якісний ПЛР лише підтверджує або виключає наявність бактерії. Визначення резистентності – стійкості до кларитроміцину, метронідазолу та інших антибіотиків – проводиться розширеним форматом ПЛР або культуральним методом при біопсії.
- Чи потрібна гастроскопія при позитивному ПЛР калу? Не обов’язково при типовій клінічній картині без тривожних симптомів. Гастроскопія показана при симптомах тривоги – знижeнні ваги, дисфагії, кровотечі, анемії – та за відсутності відповіді на ерадикаційну терапію.
ПЛР Real-Time на хелікобактер є найбільш точним неінвазивним методом діагностики інфекції Helicobacter pylori – виявляючи ДНК бактерії незалежно від імунного статусу пацієнта та стадії інфекційного процесу. Метод застосовний як при первинній діагностиці, так і для контролю ефективності лікування – даючи чітку відповідь уже через 4 тижні після закінчення ерадикаційної терапії. МЦ «Альтернатива» призначає ПЛР-діагностику хелікобактера у складі комплексного гастроентерологічного обстеження – при симптомах гастриту, дуоденіту та виразкової хвороби.
Матеріал для дослідження – кал, біоптат слизової шлунка та інші біологічні матеріали залежно від клінічного завдання. Спеціальної підготовки не потрібно; бажано виключити антибіотики за 2 тижні, інгібітори протонної помпи за 3-5 днів.
Метод дослідження – ПЛР Real-Time (полімеразна ланцюгова реакція в режимі реального часу). Виявляє специфічні ділянки ДНК Helicobacter pylori в досліджуваному зразку з чутливістю до 95-98%.
Термін виконання – 4 робочих дні.
