HLA B27 плазма ЕДТА, методом ПЛР

Типування антигену тканинної сумісності HLA-B27 (Human Leukocyte Antigen B27) методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) – це молекулярно-генетичне дослідження, яке дає змогу виявити генетичну схильність до автоімунних запальних захворювань суглобів і хребта. Виявлення антигену HLA-B27 у крові пацієнта має принципове діагностичне значення за підозри на анкілозивний спондиліт, реактивний артрит і низку інших серонегативних спондилоартропатій.

Що таке антиген HLA-B27 і навіщо його визначати

Система антигенів лейкоцитів людини (Human Leukocyte Antigen, HLA) – це комплекс білків клітинної поверхні, що кодуються генами головного комплексу гістосумісності (MHC) на 6-й хромосомі. Ці білки відіграють ключову роль у регуляції імунної відповіді: вони «представляють» фрагменти чужорідних і власних білків T-лімфоцитам, визначаючи, чи буде запущено імунну реакцію проти конкретного антигену.

Алель HLA-B27 – один із варіантів гена HLA-B, що кодує білки I класу системи HLA. Його особливість полягає в тому, що носійство алеля HLA-B27 багаторазово підвищує ймовірність розвитку певних автоімунних захворювань, насамперед тих, що уражають осьовий скелет і периферичні суглоби. Механізм цього зв’язку пояснюють кілька гіпотез: артритогенний пептид, молекулярна мімікрія між HLA-B27 і бактеріальними антигенами, порушення згортання молекули HLA-B27.

У популяції європейців антиген HLA-B27 трапляється в 6-9% здорових людей. Водночас саме його носії становлять переважну більшість пацієнтів з анкілозивним спондилітом (хворобою Бехтерєва) – понад 90% випадків. При реактивних артритах після кишкових і урогенітальних інфекцій носійство HLA-B27 виявляють у 60-80% хворих, при псоріатичному артриті з ураженням хребта – у 40-70%.

Захворювання, асоційовані з антигеном HLA-B27

Група серонегативних спондилоартропатій (запальних захворювань хребта й суглобів без ревматоїдного фактора в крові) об’єднує кілька нозологій зі спільними клінічними та генетичними рисами. Усі вони тією чи іншою мірою пов’язані з антигеном HLA-B27:

• Анкілозивний спондиліт (хвороба Бехтерєва) – хронічне запалення хребта та крижово-клубових суглобів із прогресуючим анкілозом (зрощенням суглобів); HLA-B27 виявляють у 90-95% пацієнтів.
• Реактивний артрит (синдром Рейтера) – асептичне запалення суглобів, що виникає після перенесеної кишкової чи урогенітальної інфекції (хламідіоз, єрсиніоз, сальмонельоз); HLA-B27 виявляють у 60-80% хворих.
• Псоріатичний артрит з ураженням хребта – псоріатичний артрит (ПсА) з аксіальним (осьовим) залученням; асоціація з HLA-B27 становить 40-70%.
• Артрит при запальних захворюваннях кишківника – суглобові прояви хвороби Крона та неспецифічного виразкового коліту; HLA-B27 виявляють у 30-60% за наявності спондиліту.
• Недиференційована спондилоартропатія – ранні чи стерті форми, що не відповідають критеріям конкретного захворювання.
• Передній увеїт – гострий передній увеїт (запалення судинної оболонки ока) асоційований з HLA-B27 у 50-70% випадків і може бути першим проявом прихованого спондиліту.

Показання до призначення аналізу HLA-B27 методом ПЛР

Направлення на типування HLA-B27 видає лікар-ревматолог, терапевт, ортопед або інфекціоніст за наявності клінічних ознак, що вказують на можливі серонегативні спондилоартропатії. Дослідження показане в таких ситуаціях:

• Запальний біль у спині – біль у попереково-крижовому відділі в молодих людей до 45 років, що посилюється в спокої та слабшає під час руху, з ранковою скутістю понад 30 хвилин.
• Асиметричний периферичний артрит – запалення великих суглобів нижніх кінцівок (колінного, гомілковостопного, кульшового) без явної причини.
• Артрит після перенесеної інфекції – суглобовий синдром, що розвинувся впродовж 1-4 тижнів після гострої кишкової чи урогенітальної інфекції.
• Рецидивний передній увеїт – повторні епізоди гострого запалення судинної оболонки ока нез’ясованої причини.
• Ентезити – запалення в місцях прикріплення сухожилків і зв’язок до кісток (п’яткові шпори, тендиніт ахіллового сухожилка).
• Шкірний псоріаз із суглобовими проявами – за підозри на псоріатичний артрит з аксіальним залученням.
• Сімейний анамнез – наявність у найближчих родичів анкілозивного спондиліту чи інших HLA-B27-асоційованих захворювань.
• Диференційна діагностика – виключення серонегативних спондилоартропатій за неясної клінічної картини артриту.

Переваги методу ПЛР для типування HLA-B27

Існує кілька методів визначення антигену HLA-B27: серологічний (мікролімфоцитотоксичний тест), проточна цитометрія та молекулярно-генетичні методи, зокрема ПЛР у реальному часі. Кожен із них має свої особливості.

Метод	Характеристики
Серологічний метод	Матеріал – свіжа кров із живими лімфоцитами; чутливість 80-85%, специфічність 85-90%; імуносупресивна терапія знижує точність; жорсткі вимоги до зразка
Проточна цитометрія	Матеріал – цільна кров; чутливість 90-95%, специфічність 92-96%; вплив імуносупресії мінімальний; помірні вимоги до зразка
ПЛР у реальному часі (Real-Time)	Матеріал – кров з ЕДТА; чутливість 95-99%, специфічність 97-99%; імуносупресія не впливає; мінімальні вимоги до зразка

Метод ПЛР у форматі Real-Time – найнадійніший і найбільш відтворюваний спосіб типування HLA-B27. Дослідження проводять на рівні ДНК, а не білка, тому імуносупресивна терапія не впливає на результат. Кров, стабілізована етилендіамінтетраоцтовою кислотою (ЕДТА), забезпечує оптимальне збереження ДНК для подальшого молекулярного аналізу.

Інтерпретація результату аналізу HLA-B27

Результат типування HLA-B27 якісний: антиген або виявлено, або не виявлено. Проміжних значень не буває, оскільки йдеться про генетичну характеристику, а не про концентрацію речовини в крові.

Результат	Інтерпретація та подальша тактика
HLA-B27 не виявлено	Генетичну схильність до серонегативних спондилоартропатій не підтверджено, але за вираженої клініки діагноз повністю не виключено. Потрібно виключити інші причини артриту, а за вираженої симптоматики продовжити обстеження.
HLA-B27 виявлено	Носійство генетичного маркера саме по собі не є діагнозом – у більшості носіїв захворювання не розвивається. Результат значущий за наявності клінічних симптомів: рекомендовані ревматологічне обстеження, візуалізація крижово-клубових суглобів, клінічна оцінка.

Важливо розуміти, що позитивний результат – це генетична знахідка, а не діагноз. Близько 8% населення є носіями HLA-B27, але більшість із них ніколи не захворює на анкілозивний спондиліт чи інші асоційовані нозології. Для встановлення діагнозу потрібна сукупність клінічних, лабораторних та інструментальних даних. Негативний результат за класичної клінічної картини також не виключає діагнозу – близько 5-10% хворих на анкілозивний спондиліт є HLA-B27-негативними.

Додаткові маркери під час обстеження на спондилоартропатії

Типування HLA-B27 проводять у поєднанні з іншими лабораторними та інструментальними дослідженнями для отримання повної клінічної картини. Запальні маркери – С-реактивний білок (СРБ), швидкість осідання еритроцитів (ШОЕ) – дають змогу оцінити активність запального процесу. Ревматоїдний фактор і антитіла до циклічного цитрулінового пептиду (А-ЦЦП) допомагають відрізнити серонегативні спондилоартропатії від ревматоїдного артриту. Рентгенографія та магнітно-резонансна томографія (МРТ) крижово-клубових суглобів виявляють структурні зміни.

Лікування захворювань опорно-рухового апарату в МЦ «Альтернатива»

Після отримання результатів типування HLA-B27 і встановлення діагнозу в МЦ «Альтернатива» розробляють індивідуальну програму немедикаментозного відновлення. При реактивному артриті автоімунної природи першочерговим завданням є виявлення та усунення інфекційного тригера в поєднанні з корекцією імунної відповіді. Пацієнтам із хронічними захворюваннями суглобів призначають комплексні відновлювальні програми, спрямовані на зниження запалення, покращення рухливості та сповільнення прогресування структурних змін.

При запальному ураженні хребта та крижово-клубових суглобів ефективне лікування захворювань хребта із застосуванням апаратного витягнення на апараті «Ормед-професіонал» та обколювання м’язів уздовж хребта озоно-кисневою сумішшю. Озонотерапія при захворюваннях суглобів – внутрішньовенне введення озонованого фізрозчину та обколювання суглобів – чинить протизапальну, імуномодулювальну та знеболювальну дію. Для пацієнтів із псоріатичним артритом застосовують особливий підхід, що враховує шкірні та суглобові прояви одночасно.

Корекція стану при захворюваннях імунної системи – важлива частина терапії при HLA-B27-асоційованих нозологіях, оскільки автоімунний компонент визначає хронічний перебіг запалення. Повний перелік лабораторних аналізів при захворюваннях суглобів допомагає лікарю оцінити активність процесу, функцію органів та ефективність лікування в динаміці.

Підготовка до аналізу HLA-B27 методом ПЛР

Оскільки дослідження проводять на рівні ДНК, аналіз HLA-B27 майже не чутливий до чинників, що впливають на інші аналізи крові. Проте кількох простих правил варто дотримуватися.

• Прийом їжі – здавати аналіз натще не обов’язково, але бажано через 3-4 години після останнього прийому їжі, щоб уникнути ліпемії (каламутності зразка через жири).
• Імуносупресивна терапія – не впливає на результат ПЛР-типування, на відміну від серологічних методів; лікування продовжують у звичному режимі.
• Час доби – бажано вранці, проте результат залишається достовірним і за забору в інший час.
• Фізичне навантаження – напередодні краще виключити інтенсивні тренування.
• Гострі інфекційні захворювання – за вираженої гарячки чи активної інфекції планове дослідження краще перенести на період одужання.

Матеріал для дослідження: венозна кров, взята в пробірку з антикоагулянтом ЕДТА.

Метод дослідження: полімеразна ланцюгова реакція в реальному часі (ПЛР Real-Time) – молекулярно-генетичне типування алеля HLA-B27 на рівні ДНК.

Термін готовності: 3-5 робочих днів.

Часті запитання про аналіз HLA-B27

Якщо HLA-B27 виявлено, чи означає це, що я захворію на анкілозивний спондиліт?

Ні. Носійство HLA-B27 – генетична особливість, а не діагноз. Близько 8% європейців мають цей антиген, але анкілозивний спондиліт розвивається лише в 1-5% із них. Для появи захворювання потрібне поєднання генетичної схильності з певними інфекційними, імунологічними та середовищними чинниками. За відсутності симптомів носійство HLA-B27 потребує лише спостереження та обізнаності щодо ранніх ознак запалення.

Чи потрібно повторно здавати аналіз HLA-B27?

Ні. Антиген HLA-B27 – генетичний маркер, він визначається складом ДНК і не змінюється впродовж життя під впливом хвороб, лікування чи способу життя. Одного разу отриманий результат дійсний на все життя й не потребує повторного підтвердження.

Чи можна здати аналіз HLA-B27 під час прийому нестероїдних протизапальних препаратів (НПЗП) чи імунодепресантів?

Так. Метод ПЛР працює з ДНК і не залежить від концентрації білків чи клітинного складу крові, які змінюються під дією ліків. Переривати лікування перед здачею аналізу не потрібно. Це принципова перевага ПЛР-типування над серологічним методом.

Чи передається HLA-B27 дітям?

Так. Алелі HLA успадковуються кодомінантно: якщо один із батьків має одну копію HLA-B27, імовірність передати її дитині становить близько 50%. Якщо носіями є обоє батьків, імовірність вища. Проте наявність антигену в дитини не означає, що хвороба обов’язково розвинеться: це лише один із чинників схильності.

Здати аналіз на HLA-B27 в МЦ «Альтернатива»

Типування антигену HLA-B27 методом ПЛР – точне молекулярно-генетичне дослідження, яке допомагає лікарю-ревматологу вчасно діагностувати серонегативні спондилоартропатії, провести диференційну діагностику та підібрати оптимальну лікувальну тактику. Раннє виявлення генетичної схильності за наявності клінічних симптомів дає змогу почати відновлювальні заходи до розвитку незворотних структурних змін у суглобах і хребті.

У МЦ «Альтернатива» ви можете не лише здати аналіз HLA-B27, а й пройти комплексне обстеження, отримати консультацію фахівця та розробити індивідуальну програму немедикаментозного лікування й відновлення. Запишіться на прийом – наші фахівці допоможуть розібратися в результатах аналізів і підберуть оптимальний план терапії.