Опис
Борелія (Borrelia burgdorferi sensu lato: B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii, B. garinii), кліщ і плазма крові, метод ПЛР: що показує аналіз
Дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) на борелії – це пряме виявлення ДНК Borrelia burgdorferi sensu lato в плазмі крові пацієнта чи в тілі кліща. Це принципово інший підхід порівняно із серологічними тестами (імуноферментним аналізом – ІФА та імуноблотом Western Blot): ПЛР виявляє не імунну відповідь організму на інфекцію, а саму бактерію. Саме тому ПЛР корисна в перші дні й тижні після укусу кліща, коли антитіла ще не встигли сформуватися й серологічні тести можуть давати хибнонегативний результат.
Тест визначає три основні патогенні геновиди (генетичні різновиди) комплексу B. burgdorferi sensu lato, поширені в Європі, які мають різні клінічні прояви: B. burgdorferi sensu stricto – переважає в США, трапляється в Європі; асоційована насамперед з артритом Лайма. B. afzelii – найпоширеніша в Європі, зокрема в Україні; типові прояви – хронічний атрофічний акродерматит (АКА) і лімфоцитома шкіри. B. garinii – широко поширена в Європі та Азії; асоційована переважно з нейробореліозом (ураженням нервової системи) – менінгітом, радикулопатією, паралічем лицевого нерва.
Два сценарії застосування ПЛР на борелії: дослідження кліща та крові пацієнта
ПЛР за бореліозу застосовують у двох принципово різних клінічних ситуаціях, які важливо розмежовувати.
ПЛР кліща – дослідження видаленого кліща
Це дослідження дає змогу визначити, чи є кліщ носієм борелій, ще до того, як у людини з’являться будь-які симптоми чи антитіла. Кліща доставляють до лабораторії в герметичному контейнері впродовж 24-48 годин після видалення. ПЛР кліща виявляє ДНК Borrelia в його тканинах і одночасно ідентифікує геновид.
Критично важливий нюанс: позитивна ПЛР кліща означає, що кліщ був носієм борелій, але не означає, що людина заразилася. Передача борелій від кліща до людини відбувається не миттєво: як правило, для значущого ризику зараження потрібно щонайменше 24-36 годин присмоктування кліща. Якщо кліща виявили й видалили рано, навіть за позитивної ПЛР кліща ризик інфікування може бути мінімальним. Рішення про профілактичний прийом антибіотика (зазвичай одноразова доза доксицикліну впродовж 72 годин після видалення кліща) та подальше серологічне спостереження ухвалює лікар з урахуванням часу присмоктування та інших чинників.
ПЛР плазми крові пацієнта
Дослідження плазми крові пацієнта дає змогу виявити циркулюючу ДНК Borrelia, тобто підтвердити, що бактерія справді проникла в кровотік. ПЛР крові найінформативніша в перші 2-4 тижні після зараження – у період, коли серологічні тести ще негативні через «серонегативне вікно». Саме тут ПЛР заповнює важливу діагностичну прогалину.
Важливе обмеження: борелії – переважно тканинні збудники. У крові вони циркулюють лише короткочасно в період початкової бактеріємії (присутності бактерій у крові). За дисемінованих (поширених) і хронічних форм бореліозу бактерії перебувають у тканинах (синовіальній оболонці суглобів, нервовій тканині, шкірі), а не в крові. Тому ПЛР плазми за пізніх форм бореліозу нерідко дає негативний результат навіть за активної інфекції.
Переваги ПЛР перед серологічними методами за хвороби Лайма
| Показник | ПЛР / ІФА + Western Blot |
|---|---|
| Що виявляє | ДНК бактерії / антитіла імунної системи |
| Рання діагностика (1-14 днів) | Інформативна / «серонегативне вікно» |
| Гостра фаза (2-4 тижні) | Інформативна / наростають IgM |
| Пізня стадія | Низька чутливість у крові / стабільно високі IgG |
| Перехресні реакції | Мінімальні / можливі хибнопозитивні результати |
| Вплив антибіотиків | Швидко стає негативною / антитіла зберігаються довго |
| Дослідження кліща | Застосовна / не застосовний |
| Ідентифікація геновиду | Так (B. burgdorferi / B. afzelii / B. garinii) / не розмежовує |
Коли ПЛР на борелії найінформативніша: клінічні ситуації
Перші 72 години після укусу кліща – дослідження кліща. Дає змогу оцінити, чи був кліщ носієм, і разом із лікарем ухвалити рішення про профілактику, не чекаючи симптомів.
1-4 тижні від укусу, серологічно негативний період – ПЛР плазми крові за наявності симптомів (гарячки, болю в суглобах, головного болю). Якщо серологія негативна, але клінічна картина підозріла, ПЛР може підтвердити діагноз.
Мігрувальна еритема без серологічного підтвердження – за атипової чи стертої форми кільцеподібної еритеми (почервоніння) ПЛР шкірного біоптату з краю еритеми має високу чутливість (до 70-80%). ПЛР плазми при цьому менш інформативна.
Нейробореліоз – за підозри на ураження нервової системи (менінгіт, радикулопатію) ПЛР спинномозкової рідини має вищу чутливість, ніж ПЛР крові.
Артрит Лайма – ПЛР синовіальної (суглобової) рідини з ураженого суглоба має високу чутливість (70-85%) і є методом вибору для підтвердження артриту Лайма. ПЛР крові за артриту малоінформативна.
Показання до призначення ПЛР на борелії
- Дослідження кліща одразу після його видалення – для оцінки інфікованості кліща та ухвалення рішення про профілактику
- Рання діагностика бореліозу – у перші 2-4 тижні після укусу кліща за наявності симптомів і негативної серології
- Серонегативний бореліоз – за типової клінічної картини (мігрувальна еритема, гарячка, артрит) і негативних антитіл; частина пацієнтів, особливо тих, хто отримав антибіотики в гострій фазі, не виробляє достатнього рівня антитіл
- Нейробореліоз – ПЛР ліквору (спинномозкової рідини) за менінгіту, радикулопатії, паралічу лицевого нерва нез’ясованої причини
- Суглобовий синдром після укусу кліща – ПЛР синовіальної рідини для підтвердження артриту Лайма
- Диференційна діагностика – хвороби Лайма з іншими кліщовими інфекціями (анаплазмозом, ерліхіозом, бабезіозом, кліщовим енцефалітом) під час комплексного обстеження після укусу кліща
- Імунокомпрометовані пацієнти – за ВІЛ, онкологічних захворювань, імуносупресивної терапії, у яких вироблення антитіл знижене чи затримане
Інтерпретація результату ПЛР на борелії
| Матеріал і результат | Інтерпретація |
|---|---|
| Кліщ: ДНК Borrelia виявлено | Кліщ є носієм борелій. Рішення про профілактику ухвалює лікар з урахуванням часу присмоктування |
| Кліщ: ДНК Borrelia не виявлено | Кліщ не був носієм борелій (за цього порогу чутливості). Ризик бореліозу мінімальний |
| Плазма крові: ДНК Borrelia виявлено | Бактеріємія, підтвердження бореліозної інфекції. Потрібне лікування антибіотиками за призначенням лікаря |
| Плазма крові: ДНК Borrelia не виявлено | Бактерій у крові не виявлено. Не виключає бореліозу за дисемінованих форм (бактерії перебувають у тканинах). За клінічної підозри – серологія, ПЛР інших біоматеріалів |
Алгоритм обстеження після укусу кліща в МЦ «Альтернатива»
У МЦ «Альтернатива» діє чіткий алгоритм дій після укусу кліща:
- Негайно – видалення кліща та доставка до лабораторії для ПЛР-дослідження. Кліща видаляють із дотриманням усіх правил – без роздавлювання, з негайним відправленням на аналіз; докладніше про кліщовий бореліоз (хворобу Лайма): діагностику, профілактику, лікування.
- Упродовж 72 годин – за позитивної ПЛР кліща лікар вирішує питання про профілактичний прийом антибіотика. Як допоміжну місцеву процедуру в центрі може застосовуватися обколювання місця укусу озоно-кисневою сумішшю; вона не замінює призначеної лікарем профілактики.
- Через 2-4 тижні – за наявності симптомів: ПЛР плазми крові та ІФА на IgM до Borrelia. Аналізи на хворобу Лайма в МЦ «Альтернатива» охоплюють повний комплекс серологічних і молекулярних методів.
- Через 4-6 тижнів і пізніше – серологія (ІФА IgM та IgG, за позитивного результату – Western Blot). Аналіз на антитіла IgM до Borrelia та IgG у динаміці дає змогу оцінити стадію інфекції.
Лікування бореліозу в МЦ «Альтернатива»
За підтвердженого бореліозу основою лікування є антибактеріальна терапія, яку підбирає лікар залежно від форми захворювання (зокрема доксициклін за ранньої форми, внутрішньовенні антибіотики за нейробореліозу). Як допоміжний метод у центрі за показаннями застосовують внутрішньовенну озонотерапію; вона не замінює антибіотиків.
За тривалого перебігу хвороби центр пропонує програми відновлення в межах напрямку лікування хронічного бореліозу. За артриту Лайма як допоміжний метод для зменшення місцевого запалення може застосовуватися обколювання суглобів озоно-кисневою сумішшю. Супутні кліщові інфекції (анаплазмоз, ерліхіоз, бабезіоз), які нерідко передаються тим самим кліщем і обтяжують перебіг бореліозу, виявляють за допомогою лабораторних аналізів. Після укусу кліща також важливо виключити кліщовий енцефаліт – для цього визначають, зокрема, антитіла IgM до вірусу кліщового енцефаліту.
Як правильно підготуватися до аналізу ПЛР на борелії
Для дослідження кліща:
- Видалення – видалити кліща пінцетом чи спеціальним гачком, захопивши якомога ближче до ротового апарату, і витягнути рівномірним рухом
- Чого не робити – не давити, не припікати, не змащувати олією
- Контейнер – помістити в герметичний контейнер: можна використати скляний флакон із вологим ватним диском чи спеціальний контейнер для кліщів
- Доставка – доставити до лабораторії якомога швидше, впродовж 24-48 годин
- Зберігання – не заморожувати кліща, зберігати за кімнатної температури чи при +4 °C
Для дослідження плазми крові пацієнта:
- Підготовка – спеціальна підготовка не потрібна
- Антибіотики – повідомити лікаря про їх прийом: вони швидко знижують концентрацію ДНК борелій у крові й можуть давати хибнонегативний результат
- Матеріал – плазма крові з ЕДТА (антикоагулянтом)
Матеріал для дослідження: кліщ або плазма крові з вени.
Метод дослідження: ПЛР у режимі реального часу (Real-Time).
Термін готовності: 3 робочі дні.
Часті запитання про ПЛР на борелії
- Коли після укусу кліща здавати ПЛР крові? Оптимально – через 5-14 днів після укусу. Надто ранній аналіз (перші 1-2 дні) може дати хибнонегативний результат, оскільки борелії ще не встигли розмножитися до концентрації, яку можна виявити. Через 4-6 тижнів бактеріємія, як правило, завершується, і борелії переходять у тканини – ПЛР крові стає менш інформативною.
- Чи може ПЛР кліща замінити ПЛР крові пацієнта? Ні. Це два різні дослідження з різними цілями. ПЛР кліща показує, чи був кліщ носієм. ПЛР крові пацієнта показує, чи відбулося реальне зараження. Діагноз бореліозу в людини підтверджують за клінічною картиною, позитивною ПЛР біоматеріалу пацієнта чи серологією.
- Якщо ПЛР крові негативна, але є симптоми, чи потрібно лікуватися? Рішення ухвалює лікар на підставі клінічної картини. За типової мігрувальної еритеми лікування починають одразу, не чекаючи лабораторного підтвердження. Негативна ПЛР крові не виключає бореліозу за дисемінованих форм.
- Який геновид небезпечніший – B. burgdorferi, B. afzelii чи B. garinii? Вони відрізняються за органним тропізмом (схильністю уражати певні органи), а не за «небезпечністю» загалом. B. garinii – найбільший ризик нейробореліозу. B. afzelii – хронічні шкірні форми. B. burgdorferi s.s. – артрит. Ідентифікація геновиду допомагає прогнозувати можливі ускладнення та спрямовувати діагностику.